[医学]生物制药学——第四章萃取分离法.pptVIP

第四章 萃取分离法 一、基本概念 分配比(distribution ratio)：以各种化学形式进行分配的不同溶质总浓度的比值。 5、分离因素(separation factor) 分离因素? ：在同一萃取体系内两种溶质在同样条件下分配系数的比值。 二、溶剂萃取法的基本原理 溶剂萃取的目的：设法使一种溶于液相的物质转移至另一液相。 影响弱电解质分配系数的因素： 热力学常数 表观分配系数 1、单级萃取 第二节 影响溶剂萃取的因素 一、乳化和破乳化 二、pH的影响 三、温度和萃取时间的影响 四、盐析作用的影响 五、溶剂种类、用量及萃取方式 2）影响乳状液类型的因素 1、相体积的影响 水体积: V74%(O/W) V26%(W/O) 2、乳化剂分子空间构型的影响 3、界面张力的影响 高界面张力这侧（凹面）的液体易形成内相。 4、容器壁性质的影响 亲水性强的容器易得O／W型乳状液，亲油性强的容器易形成W／O型乳状液 低毒性：乙醇、丙醇、丁醇、乙酸乙酯、乙酸丁酯 中等毒性：甲苯、甲醇、环己烷 强毒性：苯、三氯甲烷、二氧六环、四氯化碳等 工业常用溶剂：乙酸乙酯、乙酸丁酯、乙酸戊醋和丁醇等。 倾析式离心机：可同时分离重液、轻液、固相 四、溶液回收 恒沸混合物：当某两种或三种液体以一定比例混合，可组成具有固定沸点的混合物，将这种混合物加热至沸腾时，在气液平衡体系中，气相组成和液相组成一样，故不能使用分馏法将其分离出来，只能得到按一定比例组成的混合物。 1、单组分溶剂 简单蒸馏（除去不挥发性杂质） 2、低浓度溶剂 精馏 3、与水部分互溶并形成恒沸混和物的溶剂 先简单蒸馏，再精馏 4、完全互溶的混和溶剂并不形成恒沸混和物 精馏或简单蒸馏后GC测定比例再次使用 双水相萃取技术(two-aqueous phase extraction，ATPE)，又称水溶液两相分配技术：指不同的高分子溶液相互混合可产生两相或多相系统，利用物质在互不相溶的两水相间分配系数的差异来进行萃取的方法，称为双水相萃取法。 发展历史 ATPE 技术始于 20 世纪 60 年代，1956 年瑞典伦德大学的 Albertsson 发现双水相体系。 1979年德国国家生物技术中心（GBF）的 Kula 等人将双水相萃取分离技术应用于生物产品分离。 国内自 20 世纪 80 年代起也开展了 ATPE 技术研究。 一、双水相的形成 双水相形成原理： 由于高聚物之间的不相溶性，即高聚物分子的空间阻碍作用，相互无法渗透，不能形成均一相。 聚合物的不相溶性(incompatibility)： 当两种高分子聚合物之间存在相互排斥作用时，由于相对分子质量较大，分子间的相互排斥作用与混合过程的熵增加相比占主导地位，一种聚合物分子的周围将聚集同种分子而排斥异种分子，当达到平衡时，即形成分别富含不同聚合物的两相。这种含有聚合物分子的溶液发生分相的现象称为聚合物的不相容性。 双水相萃取过程 ATBE的特点： 1、条件温和，保留产物的活性； 2、分相时间短 3、容易放大，操作可连续化； 4、纯化倍数高，收率高 5、成本低 6、无有机溶剂残留问题 盐离子在两相中有不同的分配，因而在两相间形成电位差。由于各相要保持电中性，因此对于带电荷的蛋白质等物质的萃取来说，盐的存在就会使系统的电荷状态改变，从而对分配产生显著影响。 盐的种类对双水相萃取也有一定的影响。因此变换盐的种类和添加其他种类的盐有助于提高选择性。 在不同的双水相体系中盐的作用也不相同。在 PEG/磷酸盐 /水中加入氯化钠可以使万古霉素的分配系数由 4提高到 120 ,而在 PEG/DeX/水体系中只从 1.55提高到 5。 6）pH a）pH会影响蛋白质中可以离解基团的离解度，因而改变蛋白质所带电荷和分配系数。 b）影响磷酸盐的离解程度， 7）其他 Dextran、FiColl、淀粉、纤维素等高聚物具有光学活性,它们应该可以辨别分子的D、L型。 一种蛋白质对D或L型能选择性地结合而富集于一相中，可将此用于手性分配。 四、 双水相萃取的应用 可应用于蛋白质、酶、核酸、人生长激素、干扰素的分离纯化。 操作简便、经济省时、易于放大。 传统离心、沉淀等液-固分离转化为液-液分离。 五、双水相萃取技术的发展 1）廉价双水相体系的开发 变性淀粉代替Dextran 2）双水相亲和分配 在高聚物上连接亲和配基 3）液体离子交换剂 在高聚