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调 课 通 知 第二章 基本技术 第一节 实 验 室 设 置 第一节 实 验 室 设 置 基 本 实 验 室 准备室 准备室的功能就是进行一切与实验有关的准备工作。要求宽敞明亮，通风条件好。 接种室 接种室的功能是进行无菌操作。要求封闭性好，干燥清洁，能较长时间保持无菌。为了保持清洁，接种室应防止空气对流。 培养室 培养室的功能是对离体材料进行控制培养。其首要要求是要能控制光照和温度，其次为防止微生物感染，培养室应保持干燥和清洁。 辅 助 实 验 室 细胞学实验室 其功能是对培养材料进行细胞学鉴定和研究。要求清洁、明亮、干燥，使各种光学仪器不受潮湿和灰尘污染。 摄影室及暗室 其功能是进行培养材料的摄影记录和胶片冲印。在有条件的情况下可建立此实验室。 生化分析室 在以培养细胞产物为主要目的的实验室中，应建立相应的分析化验实验室，以便于对培养物的有效成分随时进行取样检查。 基本设备配置 培养容器与用具 玻璃容器 塑料容器 金属用具 塑料用具 第二节 基本技术 洗 涤 剂 玻璃器皿洗涤：新的玻璃器皿（1%盐酸浸泡一昼夜、合成洗涤剂洗刷，清水反复冲洗，蒸馏水冲洗1-2次，干燥）；已使用过的试管、烧杯、三角瓶；吸管、滴管等内径狭小的玻璃制品（先放入铬酸洗涤液中浸泡2小时以上，取出后流水冲洗半小时，蒸馏水冲洗1-2次，干燥）。 塑料用品洗涤：一般用合成洗涤剂洗涤，因其附着力较强，因此冲洗时必须反复多次，最后用蒸馏水冲洗。 金属用品洗涤：金属用品一般不宜用各种洗涤液洗涤，需要清洗时，一般用酒精擦洗，然后火焰干燥。 培养基：湿热灭菌（高压高温蒸汽灭菌），过滤除菌。 玻璃器皿：湿热灭菌或干热灭菌，即在烘箱中加热至160-180℃40分钟，或120℃2小时。 金属器皿：干热灭菌。 接种室：接种室常采用定期熏蒸，熏蒸剂常用甲醛加高锰酸钾，一般每100ml甲醛加5g高锰酸钾为一个使用单位，一般每20平方米的范围内放置1个单位剂量。熏蒸期间应该封闭3-5天。 第三节 培养基及其配制 培养基基本成分 培养基配方 培养基配制 培养基基本成分 无 机 盐 类 大量元素：使用量一般在每升几十至几千毫克。大量元素包括C、H、O、N、P, K、Ca、Mg、S。 微量元素：用量一般低于10-5～10-7克分子浓度。植物所需的微量元素有Fe、Cu、Zn、B、 Mo、Mn、Co。 有 机 成 分 糖：不可缺少。碳源；维持培养基的渗透压。 蔗糖，麦芽糖，葡萄糖，果糖，纤维二糖，甘露糖 有 机 成 分 维生素：参与酶的形成、参与植物蛋白质、脂肪的代谢等重要生命活动。如B1，B6，VPP，VH，叶酸； 肌醇：本身没有促进生长作用，但在糖类的相互转化、维生素和激素的利用等方面具有重要的作用；因而能促进培养物快速生长； 腺嘌呤：合成细胞分裂素的前体物质之一； 氨基酸：常用甘氨酸及多种氨基酸的混合物如水解酪蛋白、水解乳蛋白； 其它：天然提取物，如酵母提取物，番茄汁。 植 物 激 素 生长素：促进细胞分裂和生长，有利于外植体脱分化并启动细胞分裂，有利于形成愈伤组织 水 离体培养中，水既是培养基营养成分的溶剂，又是培养基的重要组成部分，它占培养基成分的95％。 根据培养类型及其研究层次不同，可选择使用不同处理级别的水。如原生质体培养、细胞培养以及分生组织培养一般应使用双蒸水或超纯水，以免水中残留的离子造成培养基成分的变化而影响培养效果。如果是大批量的快速繁殖培养，则可使用一般蒸馏水或纯净水以降低生产成本，提高生产效益。 实验室存放各类试验用水的容器应使用塑料制品，不能使用金属容器。存放容器应定期清洗，避免青苔和微生物滋生。玻璃容器亦不适于存放蒸馏水或纯净水，因为良好的透光性常常极易使青苔生长。 其它附加成分 琼脂：凝固剂，常用浓度0.6-1.0%。 活性炭：吸附剂，吸附有毒物质，常用浓度0.5%。 常用培养基配方(P83) 常用培养基配方： 富盐平衡培养基：MS（Murashing and Skoog, 1962）培养基，LS培养基，BL培养基，BM培养基，ER培养基 特点:无机盐浓度高,元素间比例适当,离子平衡性好,具有较强的缓冲性；营养丰富；微量元素种类全，浓度高。使用最为广泛。 中盐培养基： Nitsch (Nitsch and Nitch, 1969)培养基，H培养基，Miller培养基，Blaydes培养基 特点：大量元素无机盐约为MS的一半，微量元素种类减少，而含量增高，维生素种类比MS多，如增加了生物素、叶酸等。 常用培养基配方(P83) 低盐培养基：如White（White, 1934）培养基，WS培养基，HE培养基，HB培养基 特点：无机盐含量低，有机成分含量相对也很低。多