HPLC测定栀子炮制品中栀子苷的含量.docVIP

HPLC测定栀子炮制品中栀子苷的含量 摘　要:目的建立测定栀子炮制品（炒、焦、炭、姜炙品）中栀子苷含量的方法，考察栀子炮制前、后栀子苷的含量变化。方法采用HPLC法，Hypeisil BDS C18柱，流动相为乙腈－水（12：88），检测波长236nm。结果栀子苷在0．075—0．819μg范周内，线性关系良好（r=0．9999），炒栀子（焦、炭、姜炙品）的平均回收率为97．9％（97．6％、99．2％、99．3％），RSD=2．41％（2．35％、1．56％、2．73％）（n=6）。结论所用方法简便、准确、重复性好，可作为栀子炮制品的质量控制方法；炮制可导致栀子中栀子苷的含量下降. ?栀子为茜草科植物栀子Gardeniajasminoides E1． 1is的成熟干燥果实，具清热利尿、泻火除烦、凉血解 毒等功效。栀子人药饮片有生栀子、炒栀子、焦栀子 及栀子炭等多种规格。炮制的作用在于改变药性， 增强疗效，减少不良反应，满足临床上不同病症的用 药需要?。文献报道[ J栀子炮制后的各成分含量有 所改变，为此，特采用高效液相色谱法 ，4 J，对不同 炮制品中栀子苷的含量进行了测定，考察栀子炮制 前后栀子苷的含量变化。 ?1 实验部分 ?1．1 仪器与试剂 ?P200Ⅱ高压恒流泵(大连依利特)；UV200Ⅱ紫 外可变波长检测器(大连依利特)；HW一2000型色 谱工作站(上海千谱软件)；UV／VIS Lambdal2型紫 外分光光度计(美国Perkin Elmer)。栀子(市售，经 本所朱良辉副研究员鉴定为茜草科植物栀子Garde。 n mminoides Ellis的干燥成熟果实)；栀子苷对照品 (中国药品生物制品检定所，供含量测定用，批号： 110749．一200309)；乙腈、甲醇为色谱纯；水为重蒸馏 水；其余试剂为分析纯。 ?1．2 方法与结果 ?1．2．1 样品的炮制 ?生栀子是将经产地加工处理 (蒸或煮后再晒干)后，除去果梗、果叶，碾碎后备用 的栀子。取碾碎的生栀子1 kg，置热锅中，炒至表面 深黄色时，取出，放冷，即得炒栀子。取碾碎的生栀 子1 kg，置热锅中，炒至表面焦黄色、内部黄色时，取 出，放冷，即得焦栀子。取碾碎的生栀子1 kg，置热 锅中，炒至表面黑褐色、内部焦黄色时，取出，放冷， 即得栀子炭。取碾碎的生栀子1 kg，姜汁拌匀，置热 锅中，炒至表面姜黄色时，取出，放冷，即得姜栀子。 ?1．2．2 测定波长的选择 ?取栀子苷对照品溶液在 200～400 nm范围内扫描，测得’max为236 nm，因此， 选定236 nm为检测波长。 ?1．2．3 溶液的制备 ?取栀子苷对照品适量，加甲醇 制成37 g·rTll 的对照品溶液。取栀子各种炮制品 细粉0．1 g，精密加入甲醇25 m1，称定重量，超声处 理20 rain，放冷，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤 过，取续滤液1O ml置25 rTll量瓶中，加甲醇至刻度， 摇匀，滤膜滤过，作为供试品溶液. ?1．2．4 色谱条件 ?色谱柱为Hypersil BDS C18柱(4．6 ITlln×200 ITln)，流动相为乙腈一水(12：88)，流速为1．0 rnl·rain～，柱温25℃，检测波长236 ntn。吸取对 照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各l0 1，分别 注入液相色谱仪(图1)。 图1 栀子苷对照品【A)、炒栀子样品【B)及阴性样品(c)溶液的色谱图 F 1 HPLC ehromatograw~of control solutionlA)，sample solution (B)and negative control soluUon(c) ?1．2．5 标准曲线的制备 ?精密称取栀子苷对照品 9．31 mg，甲醇溶解并定容至25 ml，精密吸取0．2、 0．5、1、0、1．5、2、0、2．2 ml，分置10 mI量瓶中，甲醇定 容，摇匀。分别精密吸取上述对照品溶液10 l，注 入色谱仪，测定峰面积，以进样量对峰面积进行线性 回归，得回归方程为：Y：1．001×106X+73(r： 0．9999)，表明栀子苷进样量在0．075—0．819 g范 围内线性关系良好。 ?1．2．6 精密度考察 ?取“1．2．3”项下的对照品溶液 10 l，连续进样6次，依法测定峰面积，其RSD： 0．66％，表明仪器精密度良好。 ?1．2．7 重复性考察 ?取炒栀子(焦、炭、姜炙品)样 品，照“1．2．3”项下的方法处理后，测定含量，重复测 定6次，RSD=1．55％(2．08％ 、1．55％ 、1．74％)，表 明分析方法精密度良好。 ?1．2．8 稳定性考察 ?将炒栀子(焦、炭、姜炙品)供 试品溶液于制备后的0、1、2、3、6、12 h测定峰面积， RSD=1．12