微生物工程的发酵技术1.docVIP

第四章　微生物工程的发酵技术1 微生物工程中重要的发酵技术包括发酵类型、发酵方式、发酵工艺条件、发酵过程重要参数的检测和控制以及发酵过程中的染菌及控制等。 第一节 微生物工程的发酵类型 一、液态发酵 （一）液态发酵的形式 液态发酵的简单流程：菌种的制备和无菌空气的制备→原料→发酵过程的控制（包括温度、氧气、PH、水分、营养物质、泡沫等）和检测→产品的提取和纯化（包括过滤、蒸馏、萃取、吸附、沉淀、离交、结晶、干燥等）。 （二）液态发酵的优缺点 优点：产量大、占地少、易实现自动化、不受季节限制、发酵过程易控制等。 缺点：技术含量高、投资大、易污染、能耗大、环境污染处理的压力大 。 （三）液态发酵的应用 液态好氧发酵产品 厌氧发酵产品：丙酮丁醇、乙醇、甲烷 二、固体发酵 （一）固态发酵的一般过程 菌种的制备→原料→发酵过程的控制（温度、氧气、pH、水分、营养物质等）和检测（中间取样）→产品的提取和纯化（过滤、蒸馏、萃取、吸附等）。 1.好氧菌的固态发酵 2.厌氧菌的固态发酵 （二）固态发酵的优缺点 1.优点： ①常以谷物和农业废物为主要原料。 ②发酵过程中污染少。 ③回收产物过程中废物排放少。 ④发酵过程中能耗小。 2.缺点： ①物料散热困难。 ②参数的检测困难。 ③劳动强度大。 ④机械化程度低，很难实现自动化。 ⑤生产效率低。 ⑥占地面积大。 ⑦受季节影响较大。 第二节 微生物工程发酵的一般过程 一、种子扩大培养 种子扩大培养即种子制备是指将保存在砂土管、冷冻干燥管中处休眠状态的生产菌种接入试管斜面活化后，再经过扁瓶或摇瓶及种子罐逐级扩大培养而获得一定数量和质量的纯种过程，这些纯种培养物称为种子。 提供发酵产量高、生产性能稳定、数量足够而且不被其他杂菌污染的生产菌种，是种子制备工艺的关键 。 （二）种子质量的控制 1.影响种子质量的因素及其控制 （1）培养基的影响 （2）冷藏时间的影响 （3）接种种龄的影响： 细菌的种龄一般为7～24h，霉菌种龄一般为16～50h，放线菌种龄一般为21～64h。 （4）pH值、温度、湿度、通气等培养条件的影响 2.种子质量标准 ①菌种生长活力强，接种至发酵罐后能迅速生长，迟缓期短； ②生理性状稳定； ③菌体总量及浓度能满足大容量发酵罐的要求； ④无杂菌污染； ⑤生产能力稳定。 二、分批发酵（一）分批发酵的基本理论 补料-分批发酵是在分批发酵过程中补入新鲜的料液，以克服由于养分的不足而导致发酵过早结束的弊端，是分批发酵的发展，又称流加-分批发酵。该过程中物料的浓度一直维持在较低的恒定水平。 （二）分批发酵的优缺点 三、连续发酵 （一）单级连续发酵的基本理论 （二）多级连续发酵 多级恒化器最常见的是增加罐的级数和将菌体送回罐内 。 多级恒化器的优点是在不同级的罐内存在不同的条件。这有利于多种碳源的利用和次级代谢物的生产。 例如采用葡萄糖和麦芽糖混合碳源培养产气克雷伯氏菌，在第一级罐内只利用葡萄糖，在第二级罐内利用麦芽糖，菌的生长速率远比第一级小，同时形成次级代谢产物。由于多级连续发酵系统比较复杂，用于研究工作和生产实际有较大的困难。 （三）连续发酵的应用 连续发酵已被用来大规模生产酒精、丙酮、丁醇、乳酸、食用酵母、饲料酵母、单细胞蛋白、L-赖氨酸和石油脱蜡及污水处理，并取得好效果。 四、半连续发酵 在补料-分批发酵的基础上加上间歇放掉部分发酵液（行业中称为带放）就是半连续发酵。 带放是指放掉的发酵液和其他正常放罐的发酵液一起送去提炼工段的操作 。 优点：补充了前体和养分，稀释了有害的代谢物。从而弥补了补料分批发酵有害代谢物的积累、产物合成受阻的弊端，有利于产物的继续合成。 缺点： ①放掉发酵液的同时也丢失了未利用的养分和处于生产旺盛期的菌体； ②定期补充和带放使发酵液稀释，送去提炼的发酵液体积更大； ③一些经代谢产生的前体可能丢失； 五、高密度细胞发酵 目的：可以缩小反应器的容积和降低目的产物的分离提纯费用。 要实现高密度细胞发酵，必须解决好这三个问题： （1）发酵体系中菌体比例过大； （2）发酵液粘度过大； （3）溶解氧浓度过低。 （二）高密度细胞发酵的方法 1.无生长抑制物积累时高密度细胞发酵 流加补料 提高氧分压、加快搅拌速度以加大通气量 2.有生长抑制物积累时高密度细胞发酵 除去抑制物质是实现高密度细胞发酵的必要前提。除去抑制物质的方法有渗析、萃取、过滤和渗透气化等。 六、混合发酵 （一）混合发酵的含义 混合发酵又称混合培养物发酵，是指多种微生物混合在一起共用一种培养基进行发酵来生产某种产品。 （二）混合发酵的优点 ①充分利用培养基、设备、人员和时间，可以在共同的发酵容器中经过同一工艺过程，提高所需产品的质和量，或获得两种、