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Vol. 22 No.2 大连水产学院学报 第22 卷第2 期 2007 年 4 月 JOURNAL OF DALIAN FISHERIES UNIVERSITY Ap r. 2007 文章编号:10∞ -9957(2∞7)02 -0086 -06 仿刺参消化道内产琼胶酶菌株的选育及培养条件优化 马悦欣，安军，刘双连，徐高蓉， 于书渤 (大连水产学院农业部海洋水产增养殖学与生物技术重点开放实验室，辽宁大连 116023 ) 摘要:对仿刺参Apostichopωjaponicω 消化道内容物进行富集培养，以琼胶为惟一碳源进行平板初筛，摇瓶 复筛，得到一株琼胶酶活性较高的菌株 HF3。对该菌株进行紫外线诱变，获得突变菌株 HF3 -04 ，酶活力 从43.0 U/mL 增加到48.9 U/mL，提高了 13.7% 。通过正交试验，确定培养基的最佳组成为:琼胶3 glL , 硝酸镀 1 glL，磷酸氢二铀O. 5 mmoVL , pH 值8.0; 最佳培养条件为:接种量为 1% ， 250 mL三角瓶中发 酵培养基的装液量为 110 mL，摇床转速为 150 r/min ，培养温度为25 t: ，培养时间为48 h。将培养基组成 及培养条件优化后，菌株酶活力达到 80.7 U/mL，比优化前提高了 65.0% 。 关键词:仿剌参;琼胶酶;紫外线诱变;培养条件优化 中图分类号: Q935 文献标识码 A 琼胶是一种亲水性的红藻多糖，包括琼脂糖和 膏 1 g ，磷酸铁0.01 g ，琼胶 15 g ，陈海水 1 0∞ 硫琼胶两种组分。琼、胶降解形成的低聚糖产物可作 mL, pH 为 7.6 。 1. 1. 3 发酵产酶系列培养基 1)液体种子培养 为功能性食品、药品的原料或添加剂，近年来发现 其在日用化工领域中也有新的用途[1] 。琼胶酶是 基:琼胶2 g ，蛋白陈 10 g ，酵母膏 10 g ，磷酸氢 一种工具酶，可以作为研究红藻多糖结构的工 二饵 1 g ，氯化镀 1 g ，陈海水 1 0∞ mL， pH 为 具[2] 。利用琼胶酶可以降解红藻的细胞壁，获得 7.6; 2) 发酵培养基:琼胶2 g ，磷酸氢二饵 1 g , 红藻单细胞、原生质体以及蛋白质和 DNA ，因而 氯化镀 1 g ，陈海水 1 000 mL , pH 为7.6。 琼胶酶在研究红藻细胞学、生理代谢和遗传育种等 1.2 菌株的筛选 方面有着重要的意义[3] 。 1. 2.1 富集培养试验用活仿刺参于2005 年4 月 用海洋微生物产生的琼胶酶制备琼胶低分子量 活性片段，已成为琼胶工业化研究的重要方向。目 取自大连拉树房海参养殖厂，快速带回实验室后， 前，降解琼肢的海洋细菌主要是从海藻、海水和底 无菌操作取消化道内容物，置于盛有25 mL富集培 泥等样品中分离得到[←10] 0 Erasmus 等川研究发 养基的三角瓶 (250 mL，下同)中， 25 c下摇床 现，鲍消化道中也存在着能降解琼胶的细菌。本试 培养 (150 r/min) 3 d 后，吸取5 mL 培养液到另 验中，作者从仿刺参Apostich