考马斯亮蓝染色法测定蛋白质浓度含(_Bradford_法)教学幻灯片讲义.pptVIP

蛋白质含量的测定 ——考马斯亮蓝染色法（ Bradford 法） 一、实验目的掌握Brodford法测量蛋白质浓度的原理和操作技术。 二、实验原理 考马斯亮蓝法是根据蛋白质与染料相结合的原理设计的，这是一种迅速，可靠的通过染色法测定溶液中蛋白质浓度的方法。 尽管相对于其他方法来说，此法的干扰物较少，但由于每种蛋白质与该染料的结合能力不同，故标准品的选择非常重要，选择尽可能与待测蛋白一致的样品做标准，能最大限度的提高该方法的准确性。 考马斯亮蓝G250有红蓝两种不同颜色的形式。在一定浓度的乙醇及酸性条件下，可配成淡红色的溶液，当与蛋白质结合后，产生蓝色化合物，反应迅速而稳定。经研究证明，染料主要是蛋白质中碱性氨基酸和芳香族氨基酸残基相结合。 反应化合物在595nm处有最大光吸收，化合物颜色的深浅在一定范围内与蛋白质浓度成正比，，因此可通过测定595nm处的光吸收值来计算蛋白的含量。 考马斯亮蓝染色法的优点： （1）灵敏度高（比Lowry法灵敏4倍），测其最低蛋白质测量可达1mg。 (2)测定快速,简洁。只需加入一种试剂，完成一个样品的测定，只需5min左右。 (3)此方法干扰物少 如干扰Lowry法的K+、Na+、Mg+例子，Tris缓冲液、蔗糖、甘油、EDTA等均不干扰此法。 考马斯亮蓝染色法的缺点： 1.