[理学]第五章分子发光分析.ppt

第五章 分子发光分析法 5.1 荧光分析法 5.2 磷光分析法 5.3 化学发光分析法 首先我们来了解以下几个重要概念： 一、分子发光（Molecular Luminescence）：基态分子 吸收了一定能量后，跃迁至激发态，而激发态分子以辐 射跃迁形式将其能量释放返回基态时，产生分子发光。 二、分子发光的类型： 1.按激发的模式分类 2.光致发光按激发态的类型分类 荧光分析法其特点： 1.灵敏度高；检测限比吸收光谱法低1-3个数量级，通常在 ppb级。 2.取样量少，操作简单。 3.选择性比吸收光谱法好，能产生紫外-可见吸收的分子不一 定发射荧光或磷光。 荧光分析法的应用： 在药物、临床、环境、食品的微量和痕量分析以及生命 科学研究各个领域都具有重要的意义。 二、基本原理 （一）分子荧光的产生 1、分子发光 室温下，大多数分子处于基态的最低振动能层。处于基 态的分子吸收能量后被激发为激发态。激发态不稳定，将很 快衰变到基态。若返回到基态时伴随着光子的辐射，这种现 象被称为“发光”。 2、激发单重态S与激发三重态T 处于分子基态单重态的一个电子被激发时，通常跃迁至 第一激发单重态的能级轨道上，也可能跃迁至能级更高的单 重态上，这种跃迁是符合光谱选律。如果跃迁至第一激发三 重态轨道上，则属于禁阻跃迁。 3、分子荧光（磷光）产生示意图 每个分子具有一系列严格分立的能级，称为电子能级， 每个电子能级中又包含了一系列的振动能层和转动能层。图 中基态用S0表示，第一电子激发单重态和第二电子激发单重 态分别用S1、S2表示，0、1、2、3?表示基态和激发态的振 动能层（见下图），第一、二电子的激发三重态分别用T1和 T2表示。 4、常用术语 （1）振动弛豫：在同一电子能级上，分子由较高振动能 级向该电子态的最低振动能级的非辐射跃迁，其过程速率极 大，在10－14～10－12内即可完成。 （2）内转化：相同多重态的两个电子态之间（如S2 S1） 的非辐射跃迁，其转化速率取决于两能级之间的能量差，相 邻单重激发态之间能级较近，其振动能级常发生重叠，内转 化很快。 在通常情况下，分子被激发到任一个电子激发态，经内 转化和振动弛豫都会跃迁至最低电子激发态的最低振动能级 上，而且时间极短(10－13~10－11)。 （5）磷光的产生 处于激发三重态的分子跃迁返回基态时所产生的辐射。 在同样的分子轨道上，处于三重态分子能量低于相应单重态 分子（为什么？），再加上体系间的窜跃和振动弛豫消耗光 子的能量，那么其磷光l3 ，大于所发出的荧光l 3。且这种跃 迁属于禁阻跃迁，其发光速率较慢，因而磷光较之荧光有较 长的寿命，当激发光停止后，荧光立即消失，而磷光则将持 续一段时间（10－3～10s）。 表5-1 光致发光的主要过程 （二）荧光效率及其影响因素 1、荧光效率（ ?f ） 又称为荧光量子产率，它是用来描述辐射跃迁概率的大 小，其定义： 3、影响荧光强度的外界因素 （1）温度：大多数分子在温度升高时，分子与分子之间， 分子与溶剂分子之间的碰撞频率升高，非辐射能量转移过程 升高，荧光效率降低，因此，降低温度，有利于提高荧光效 率 。由于三重态的寿命比单重态寿命更长，温度对磷光影响 比荧光更大。 式5－5为荧光（磷光）定量分析的基本依据，若以荧光强度 对荧光物质的浓度作图，在较低的浓度下，呈现良好的线性 关系，当浓度较高时，其线性关系将发生偏离，其原因除了 在上式中作的近似计算外，还存在猝灭效应。 荧光的猝灭：荧光物质分子与溶剂分子或溶质分子之间 相互作用导致荧光强度下降的物理或化学作用过程。 猝灭剂：与荧光物质分子发生相互作用而引起荧光强度下 降的物质。 （二）光源 1.对光源的要求 （五）荧光的激发光谱 荧光激发光谱：将待观测的发射波长（发射单色器） 固定，然后改变激发光波波长（激发单色器），根据所测荧 光强度与激发光波长的关系得到激发光谱曲线。如下图所 示： 三、荧光分析法的应用 （一）无机化合物的分析 无机化合物的荧光分析主要依赖于待测元素与有机 试剂所组成的配合物，它们在紫外线或可见光照射下如 能发生荧光，则由荧光强度可以测定该元素的含量。这 种方法称为直接荧光测定法。自从186