HIV 操作规程.docx

人类免疫缺陷病毒HIV（1＋2型）定性诊断试剂盒时间分辨免疫荧光分析法标准操作规程文件编号编写者编写日期审核者批准者 医院医院：科：室：人类免疫缺陷病毒HIV（1＋2型）定性诊断试剂盒时间分辨免疫荧光分析法标准操作规程版本：执行日期： 共3 页 第 1 页1.原理HIV试剂盒(TRIFMA法)是应用双抗原夹心免疫分析原理，在微孔内包被HIV抗原，以Eu3+标记另一HIV抗原。在微孔内加入标本后，标本中的HIV抗体通过免疫反应与微孔内表面的HIV抗原形成形成固相HIV抗原-HIV抗体复合物；洗涤后，加入Eu3+标记的HIV抗原(HIV抗原-Eu3+),免疫反应后在微孔内表面形成固相的HIV抗原-HIV抗体-HIV抗原-Eu3+复合物；洗涤除去游离的Eu3+标记HIV抗原，加入荧光增强液，增强液将固相表面的复合物上的Eu3+解离至溶液中，Eu3+与增强液中的组分形成强荧光络合物，其荧光强度与血清中的HIV抗体浓度成正相关。通过测定荧光强度，测定血清样本中的人类免疫缺陷病毒HIV。2.样本处理血液样本尽快送实验室，室温下离心分离出血清，置于洁净离心管中保存。3.试剂 本科室使用苏州新波生物技术有限公司人类免疫缺陷病毒HIV（1＋2型）时间分辨免疫荧光法定性诊断试剂盒，试剂盒主要组分如下：阴阳性对照：2瓶(各1m1)铕标记物：1瓶(1m1)，冻干品，使用时作1：20倍稀释浓缩洗液：1瓶(40 m1)，使用前用去离子水做1：25倍稀释分析缓冲液 1瓶(20 m1)增强液：1瓶(20 m1)微孔反应板：一块(12*8，包被有HIV抗原)吸头：20支封片纸：3张(封板用)说明书：1份医院：科：室人类免疫缺陷病毒HIV（1＋2型）定性诊断试剂盒时间分辨免疫荧光分析法标准操作规程版本：执行日期： 共 3 页 第 2 页4.仪器（用户自备）时间分辨荧光分析仪，ANYTEST2000；微孔洗涤机，Egate2310；微孔振荡器，2510变频振荡器；5.操作步骤试剂的准备：将浓缩洗液做1：25倍稀释，作为工作洗涤液备用；复溶标记物：在标记物冻干品加入1.0m1蒸馏水或去离子水，混匀后至少静置10分钟。编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴、阳性对照各2孔。加样：分别在相应的微孔中加入阴性对照、阳性对照及待测样品100ul，并加贴封片。第一次温育：在室温（20～250C）下，用振荡器缓慢震荡孵育60分钟。配制HIV抗原-Eu3+工作液（第二步温育前1小时之内配制）：对每一条12孔板，去75ulHIV抗原-Eu3+，加入1.5ml分析缓冲液，充分混匀。第一次洗涤：在第一次孵育结束后，用微孔洗涤机洗涤5次，扣干。每孔加入100u1 HIV抗原-Eu3+工作液，并加贴封片。第二步温育：在室温（20～250C）下，用振荡器缓慢震荡孵育40分钟。第二次洗涤：在第二次孵育结束后，用微孔洗涤机洗涤5次，扣干。每孔中加入增强液100u1(加样过程中避免碰到小孔边缘或其中的试剂，尽量避免污染)，并加贴封片纸。用振荡器轻摇5分钟，选择相关程序检测(在半小时内完成)6．临床意义人类免疫缺陷病毒（ HIV ）是艾滋病出现的病毒标志物，在感染艾滋病病毒时即出现HIV抗原阳性，其检测结果有助于对艾滋病携带者的诊断，对减少输血后艾滋病，控制艾滋病母婴传播也有积极意义。医院：科：室人类免疫缺陷病毒HIV（1＋2型）定性诊断试剂盒时间分辨免疫荧光分析法标准操作规程版本：执行日期： 共 3 页 第 3 页7.参考值 若S／CO＜1，判为HIV抗体阴性；，若S／CO＞1，判为HIV抗体阳性。8．检验结果的解释8．1临界值计算：阴性对照平均荧光强度记为NCx，阳性对照平均荧光强度记为PCx，Cutoff= PCx×0.03+NCx。计算各待测样品的S/CO值（待测样品的荧光计数值/ Cutoff值）。8．2 质量控制：NCx应6000，PCx应≥100000。如果NCx≥6000或PCx100000，本次实验无效。 注意：初试阳性样本应重新取样进行双孔复试，复试阳性者应按“全国HIV检测管理规范”送HIV确证实验室进行确证实验。9.注意事项9.1 HIV抗体的检测必须符合HIV实验室的管理规范和生物安全守则的规定，防止交叉污染。操作时必须带手套、穿工作服，严格执行消毒隔离制度。9.2操作应按说明书严格执行，不要混用不同批号的试剂，不要使用过期的试剂。9.3尽量建立一个干净无尘的实验室环境，对实验的成功起到决定性作用。(因为尘土中含有很多金属离子，会影响实验结果)。9.4试剂盒从冷藏环境取出后，阴／阳性对照、所需数量的微孔板、分析缓冲液和样本应恢复至室温方可使用，未使用完的微孔条用自封袋密封保存。9.5振荡器按照《2510变频振荡器标准操作规程》设定需要的振荡频率。9.