[初二理化生]2010版药典微生物检验培训内容.ppt

2010版药典微生物检验培训内容 原有：无菌检查法 微生物限度检查方法 灭菌法 新增：微生物限度检查法指导原则 防腐剂效力检查法指导原则 药品微生物实验室规范指导原则 药品微生物检验替代方法验证指导原则 补充：全封闭式无菌检测系统和无菌隔离技术 的应用及其验证 无菌检查法 总则：环境、设备、人员 培养基：品种、制备、灭菌、贮存、适用性检查 稀释液、冲洗液：品种、制备、灭菌 方法验证试验：直接接种法、薄膜过滤法 供试品的无菌检查：供试品的处理、对照试验、 直接接种法、薄膜过滤法、培养及观察 结果判断 培养基适用性检查 包括：无菌性检查 灵敏度检查 灵敏度检查 菌种：不得超过5代 菌液：浓度100cfu/ml 接种：2管+菌液，1管空白 结果判断：+菌液——生长良好 空白——无菌生长 菌种和菌液制备 菌液制备操作步骤 接种（表格） 接种（图示） 方法验证试验 Why：确认供试品无抑菌活性或已被消除 When：建立检查方法 原检验条件改变 产品组分发生改变 What：供试品是否有抑菌性 采取消除抑菌性的方法 How：按供试品的无菌检查法 验证直接接种法 重点： 1、供试品有无抑菌性 2、梯度加入培养基 操作流程（表格） 操作流程（图示） 验证直接接种法 结果判断： 所有含供试品的管生长良好→供试品无抑菌作用→可以用直接接种法 任一含供试品的管生长微弱、缓慢或不生长→供试品仍有抑菌作用→解决方法（目的：消除抑菌活性）扩大培养基用量、薄膜过滤法或其他 不管采用什么方法，都要进行验证！ 验证薄膜过滤法 重点： 1、供试品有无抑菌性 2、梯度加入冲洗液 操作流程（表格） 操作流程（图示） 验证薄膜过滤法 结果判断： 所有含供试品的容器生长良好→供试品无抑菌作用→可以用直接接种法 任一含供试品的容器生长微弱、缓慢或不生长→供试品仍有抑菌作用→解决方法（目的：消除抑菌活性）增加冲洗量、增加培养基用量、使用中和剂、更换滤膜品种等等 不管采用什么方法，都要进行验证！ 验证中和法 原理：加适量中和剂（可与前两种方法联合使用） 重点：1、证明中和剂对试验菌无毒性 2、梯度加入 结果判断： 所有含供试品的管生长良好→供试品无抑菌作用→中和剂对试验菌无毒性 任一含供试品的管生长微弱、缓慢或不生长→供试品仍有抑菌作用→解决方法（目的：消除抑菌活性）增加中和剂用量、增加冲洗量/培养基用量、更换滤膜品种等等 不管采用什么方法，都要进行验证！ 微生物限度检查法 总则 检验量：最小包装单位 制备供试液：含抑菌成分 细菌、霉菌及酵母菌计数：平皿法、薄膜过滤法 控制菌检查：7种.供试液制备、增菌、分离、确认试验、结果判断 结果判断 稀释液 培养基 分类产品微限标准 计数培养基的适用性检查 要点：需用对照培养基（中检所）、回收率 结果判定：1、 2、菌落形态大小应与对照培养基上 的菌落一致 计数方法的验证 目的：考察供试液制备过程中微生物受影响的程度 要点：至少应进行3次独立的平行试验 试验菌种：同适用性检查 验证方法：1、试验组 (1)平皿法:1ml供试液+50～100cfu试验菌→倾注培养基 (2)薄膜过滤法:规定量供试液+50～100cfu试验菌(最后 一次冲洗时)→过滤→培养基 2、菌液组 3、供式品对照组 4、稀释剂对照组 结果判断：在3次独立的平行试验中 (1)稀释组对照组的菌数回收率≥70% (2)试验组的菌数回收率≥70% (3)若试验组的菌数回收率70%，应采用其他方法或联合 方法消除供试品的抑菌活性 控制菌检查用培养基的适用性检查 检查项目：促生长能力、指示能力、抑制能力 结果判定：与对照培养基比较 促生长能力——菌落大小、形态特征 抑制能力——无菌生长 指示能力——生长情况、指示剂反应 控制菌检查方法的验证 方法：规定量