[理化生]22动物细胞工程.ppt

知识目标： 1、简述动物细胞培养的过程 2、动物细胞培养的特点 3、细胞株与细胞系的区别 4、动物细胞培养的条件 5、简述动物细胞培养的应用 6、图示体细胞核移植的过程 7、体细胞核移植选什么作受体细胞？为什么？ 知识目标： 8、促进动物细胞融合的方法？ 9、单克隆抗体的制备过程 10、传统抗体与单克隆抗体的特点 11、杂交瘤细胞的特点 12、10代以内的传代细胞具有什么特点？ 细胞贴壁过程 三、动物细胞融合 三、动物细胞融合 三、动物细胞融合 DNA分子复制的两条途径 不同细胞的DNA合成途径 去核卵母细胞 供体体细胞 重组细胞 重组胚胎 克隆动物 代孕母牛C 卵母细胞培养至减Ⅱ中 供体细胞培养 高产奶牛A 供卵奶牛B 物理或化学方法激合受体细胞，使其完成细胞分裂和发育过程。 注入，刺激使细胞融合 胚胎移植技术 (4)为什么体细胞核移植技术要选MⅡ期的卵母细胞作为受体细胞？ 答： 因为MⅡ期的卵母细胞体积大，易操作，含有促使细胞核全能性表达的物质和营养条件。 5、体细胞核移植技术的应用前景 　　①在畜牧业中可以加速家畜遗传改良的进程； 　　②保护濒危物种； 　　③生产医用蛋白质及组织器官移植的供体； 二、动物体细胞核移植技术和克隆动物 6、体细胞核移植技术存在的问题 　①成功率低； 　②克隆动物畸形率、死亡率高，易出现早衰等问题； 　③食品安全性问题； 二、动物体细胞核移植技术和克隆动物 1、概念：也叫细胞杂交，指两个或多个动物细胞结合成一个细胞的过程。整合后的细胞叫杂交细胞。 2、细胞融合方法： 物理方法：离心、电刺激、振动 化学方法： PEG（聚乙二醇） 生物方法：灭活的病毒 灭活的含义P52资料卡 四、动物细胞融合 细胞核 病毒颗粒 细胞核 灭活的病毒与细胞膜上的糖蛋白作用，使细胞相互融合。 细胞膜上的糖蛋白分子和脂质重新排布 细胞膜打开 细胞融合，形成杂种细胞 3、细胞融合意义： 突破了有性杂交的局限，使远缘杂交成为可能； 植物、动物细胞融合的比较 用胰蛋白酶使之分散成单个细胞 用纤维素酶或果胶酶去壁得原生质体 杂交前处理 物理、化学 灭活的病毒 物理 化学 诱导细胞 融合方法 获得细胞产品 获得杂种植株 目 的 细胞膜的流动性 细胞膜的流动性细胞全能性 原 理 动物细胞融合 植物体细胞杂交 比较项目 四、单克隆抗体的制备 　　①生产：注射抗原→从动物血清中分离 ②问题：抗体产量低、纯度低、特异性差； １、传统抗体生产及特点 四、单克隆抗体的制备 　　①B淋巴细胞受抗原刺激后，可以产生抗体 　　②动物体内的B淋巴细胞可以产生百万种以上的抗体，每种抗体对特定的抗原具有特异性免疫作用； 　　③每一个淋巴细胞只能产生一种抗体； ２、B淋巴细胞与抗体的关系 四、单克隆抗体的制备 3、单克隆抗体的制备①思路：　　克隆单一的浆细胞成为细胞群，同时解浆细胞不能无限增殖的问题－－将浆细胞与骨髓瘤细胞融合； 四、单克隆抗体的制备 3、单克隆抗体的制备②过程 小鼠注射抗原 体外培养 注射到小鼠腹腔 B淋巴细胞 骨髓瘤细胞 诱导融合 3种两两融合细胞 HAT选择培养基筛选 多种杂交瘤细胞 专一性抗体检验 能产生某一种特定抗体的杂交瘤细胞 单克隆抗体 单克隆杂交瘤细胞 四、单克隆抗体的制备 3、单克隆抗体的制备 ③单克隆抗体的特点： 特异性强、灵敏度高、可大量生产 ④单克隆抗体的原理： 免疫原理 细胞融合原理 动物细胞培养原理 四、单克隆抗体的制备 3、单克隆抗体的制备 ⑤应用 作为诊断试剂 用于治疗疾病和运载药物 四、单克隆抗体的制备 3、单克隆抗体的制备 ⑥杂交瘤细胞的特点： 既能无限增殖，又能产生特异性抗体； * * * 动物细胞工程的基本技术 动物细胞培养 动物细胞核移植 动物细胞融合 单克隆抗体制备 动物细胞工 程 一、动物细胞培养 1、概念：就是从动物机体中取出相应的组织，将它分散成单个细胞，然后放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。 2、过程 ①取材：选取动物胚胎或幼龄动物的组织、器官（分裂能力强） ②分散成单个细胞： 用胰蛋白酶(PH:8-9)或胶原蛋白酶 一、动物细胞培养 2、过程 ③制成细胞悬液： 用培养液将分散的细胞制成细胞悬液； ④原代细胞培养： 动物组织消化后的初次培养； 一、动物细胞培养 2、过程 ⑤传代细胞培养： 贴满瓶壁的细胞重新用胰蛋白酶处理后分瓶继续培养，让细胞继续增殖； 10代以内的细胞能保持正常的二倍体核型； 一、动物细胞培养 动物胚胎或幼龄动物的组织、器官