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选修三重要知识点整理 第一章 基因工程 1.限制性核酸内切酶（限制酶） 主要从原核生物（用于切割外源DNA，保护自身）中分离纯化出来， 识别序列由6个核苷酸（或4、5、8个）组成。 末端种类：平末端和黏性末端 2.DNA连接酶 效率低 * 3.运载体 (1)作用： ①作为运载工具，将目的基因转移到宿主细胞内。 ②利用它在宿主细胞内对目的基因进行大量复制。 (2)种类：质粒、λ噬菌体的衍生物和动植物病毒等。 (3)条件： ①有一个或多个限制酶切位点 ②能自我复制 ③有标记基因 （4）一般来说，天然载体往往不能满足人类的所有要求，因此在基因工程中，对某些天然的载体进行人工改造。 * 4.基因工程中形成的重组DNA是DNA分子片段的连接，而不是合成DNA分子或转录合成mRNA的过程 5.DNA连接酶:不需要模板 DNA聚合酶:需要模板 DNA复制时 都形成磷酸二脂键 6.基因操作程序： Ⅰ获取目的基因 Ⅱ构建表达载体（核心） Ⅲ导入受体细胞 Ⅳ目的基因的检测与鉴定 * Ⅰ获得目的基因 （1）基因组文库（所有的） 部分基因文库（部分的），如cDNA文库 （2）PCR技术扩增目的基因 原理：DNA复制 指数方式增加 需要：模板DNA，原料（游离的四种脱氧核苷酸），引物， 　　　DNA聚合酶 （３）人工合成（基因较小） 化学合成：DNA合成仪（已知序列） 反转录法：未知序