脑红蛋白与脑保护.docVIP

脑红蛋白与脑保护 曲向东 岳云 首都医科大学附属北京朝阳医院 100020 成人的大脑含有神经细胞超过千亿，其中包括大约1015的突触连接，至少需要心输出量的10％的血液供应，来维持大脑的功能和意识，较长时间的阻断血流能够导致脑血管意外（如中风），这会导致神经功能障碍甚至死亡。低氧的损伤能够诱导部分由组织携氧球蛋白介导的复杂的细胞和分子机制。 脑红蛋白(neuroglobin, NGB)是新近发现的第三类神经系统特异的携氧球蛋白，1主要在脊椎动物神经组织中高度表达，与脑内氧供应密切相关，在分子水平调节脑组织氧供应状态。脑缺氧后，脑红蛋白表达上调，以维持对脑组织的氧供应。该文就脑红蛋白的结构、特性、功能及其与缺氧缺血性脑损伤的关系作一综述。 一．NGB的蛋白结构及其基因结构 实验证实NGB主要以单体形式存在，有少量为多聚体，主要为二聚体，极少量为四聚体，其二聚体以二硫键相连。单体形式的NGB由含有151个氨基酸的单链组成，分子量为17KD，与脊椎动物其他球蛋白有很低的同源性（与肌红蛋白＜21％，与血红蛋白＜25％）1。频谱测定发现，生理条件下NGB以还原（亚铁）状态即脱氧形式存在，其结构为六配体，在380-650nm记录重组小鼠及人NGB的吸收光谱发现，还原形式的NGB在560nm（α光谱带）及426nm（Soret光谱带）有最大吸收峰，与六配体结构的细胞色素类似。然而在缺氧状态时NGB主要以突变体形式存在，该突变体在423nm附近的Soret光谱带由红色变为蓝色，与五配体的HGB相似（在430nm为吸收峰），说明在病理状态下NGB可能主要以五配体形式存在。NGB的三级结构还不明确，有研究发现与非共生植物的HGB相似，其三级结构可能为E-螺旋结构。光谱分析发现，NGB末端血红素袋存在结构异质性，从而形成多种结合形式及多个配体结合位点，配体可在各结合位点间移动，该现象可能与NGB局部特定构象有关，这种结构异质性可能是NGB作为氧气载体的结构基础。 在对表达序列标签(expressed sequence tag,ETS)数据库进行序列同源性分析过程中，Burmester1等最早发现有一些EST序列和HGB, MGB具有较保守的同源性。随后通过实验研究，Burmester等克隆了人和小鼠NGB的编码区cDNA序列。序列分析表明，NGB基因编码151个氨基酸，不同物种NGB的序列之间保守性明显高于HGB和MGB，例 如人和小鼠的氨基酸序列之间的一致性则高达94%，但与其他脊椎动物的球蛋白相比，序列一致性并不是很高，例如小鼠NGB与脊椎动物MGB序列的一致性21%，与HGB一致性25%。随后陆续获得了大鼠、河豚鱼和斑马鱼等脊椎动物NGB基因。2 研究发现，人NGB为单拷贝基因，定位于染色体14q24，全长cDNA序列共1909bp，基因组序列为8041bp，含有四个外显子和三个内含子，与只有三个外显子和两个内含子的MGB和HGB存在结构上的不同。该基因的启动子区域含有几个潜在的转录因子Spl的结合位点。 NGB是经典的“three-over-three螺旋三明治折叠结构特性，最近已经有通过X射线衍射对NGB晶体的三维结构进行研究的报道(Pesce等3)。 二.NGB的分布 用原位杂交及免疫组化技术分析发现，4NGB mRNA阳性细胞广泛分布于脑皮质，尤以颞叶听区、扣带皮质、梨状皮质中的阳性细胞较为密集，在新皮质的第Ⅱ-Ⅴ层均有阳性神经元分布，细胞形态以中型细胞居多，阳性产物集中于细胞质，海马的各区（CA1－CA4）均有NGB mRNA阳性神经元分布，阳性细胞主要是锥体细胞，在锥体细胞层外的其他海马区域内有稀疏的阳性细胞；前脑核团中，杏仁中央核、杏仁内侧核、杏仁皮质前核、杏仁皮质后核、梨状内核等均见NGB mRNA 阳性神经元的分布，数量中等，染色较强；丘脑、下丘脑中NGB mRNA阳性神经元散在分布，数量不多；4嗅球的僧帽细胞层染色阳性，胞体大，染色强度较弱；小脑中NGB mRNA 阳性细胞染色强，主要分布于浦肯野细胞；在脑干，脑桥网状结构及脑桥核中也观察到NGB mRNA阳性细胞的分布，数量较少。5 最近Schmidt6等报道NGB在视网膜神经元中普遍表达，且在小鼠视网膜上表达量极高(接近100μmol/L )。视网膜上的NGB密度大概是在大脑中的100倍，与MGB在肌肉中的表达量近似。通过杂交方法分析发现，NGB在光感受细胞的内节以及内、外颗粒层和神经视网膜的节细胞层上显现强杂交信号。亚细胞定位光感受细胞时发现NGB主要在有大量线粒体的内节顶端椭圆区，提示高耗氧的视觉感受和视觉形成过程中也可能有NGB的参与。 Reuss7等和Wystub8也分别分析了小鼠和大鼠中NGB的表达。通过原位杂交发现，NGB在大多数的中央和周围神经细胞