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流体力学技术 内容简介 流体力学技术 离心法 渗透压法 黏度法 一、离心法 离心法是随着超速离心机的产生而发展起来的一种测量生物大分子分子量的方法。 2、超速离心法测定高分子的分子量 （1）沉降速度法 当超速离心机高速旋转时（离心场≥106g）,大分子溶液中均匀分布的的溶质以一定速度移向离心池底部，将溶液分为三部分：上清液、界面、坪区（浓度均一的溶液）。通过光学方法监测界面的移动，测量坪区溶质分子的移动规律。 沉降速度法特点： 1.测定溶质分子量前须预先知道扩散系数D的 值； 2.当分离带有不同沉降系数的混合溶液时，沉 降速度较快的分子在穿过沉降速度较慢的分 子时会受到污染而引起误差； 3.不受微粒形状的限制。 （2）沉降平衡法 应用平衡法时，要求离心场不是很强。此时离心力不足以使全部溶质分子都集中在离心池底，而是形成很大的浓度梯度。经过一段时间后，这个很大的浓度梯度产生的扩散足以与池里各个部分的沉降作用达到平衡。因为处在平衡状态，平衡法与溶质的形态及溶液的黏度无关，因而有可能用准确地热力学方法来处理。 沉降平衡法的优缺点： 优点：与速度法相比，沉降平衡法不必测定扩散 系数，可以直接从浓度的分布直接计算出 M值。 缺点：试验时间太长，这对稳定性不高的体系 （如蛋白质等生命物质）的测定是很不利 的，而且不能提供微粒形状的信息。 3.离心法在生物学上的应用 ?利用沉降速度技术分析沉降界面来测定制剂均质性：出现单个清晰的沉降界面一般认为是均质，制剂中的杂质以另外一些峰出现在主峰的两侧或者一侧。 ?大分子构象上的变化可以通过检查样品在沉降过程中的差异来证实：分子越是紧密，他在溶剂中受到的摩擦阻力就越小；分子越是松散，摩擦阻力就越大。 二、渗透压法 渗透压：半透膜两侧液面达到平衡状态后所出现的 压强差。 1、理论基础 1886年范特荷甫（van’t Hoff）根据实验数据得出一条规律：对稀溶液来说，渗透压与溶液的浓度和温度成正比，它的比例常数就是气体状态方程式中的常数R。 这条规律称为范特荷甫定律。用方程式表示如下： πV=nRT 　　或π=cRT 　　 式中π为稀溶液的渗透压，V为溶液的体积，c为溶液的浓度，R为气体常数，n为溶质的物质的量，T为绝对温度。 2、渗透压的测量 实验测量渗透压的方法有渗透平衡法，升降中点法和速率终点法。 （1）渗透平衡法： 恒温下将渗透计静止一段时间，任其自然达到平衡状态，然后记下两边液面的高度差，减去毛细升高校正项就是渗透压值。 （2）升降中点法 先将渗透压计中的溶液液面提高，使其高于平衡值?h。在趋向渗透平衡过程中液面将不断下降，记录各个时间的液面高度，并绘制坐标图，得到下降曲线。再将溶液液面高度降至平衡值以下?h处，以同样的步骤得到上升曲线。将两条曲线上对应同一时间的点连接起来并求其中点，这些中点的连线趋于一水平线，该线所在的高度就是渗透平衡时的液柱高，将这个值减去毛细校正项即得到渗透压值，这个实验方法所需的实验时间较渗透平衡法的要少的多。 （3）速率终点法： 在不同液面高度差或外加压强下测定溶液的透过速率dh/dt。在dh/dt依?h的坐标图，用内插法求出dh/dt=0时的?h值，即可得渗透压。 此法无需等待渗透平衡，所以测量很迅速，对实验精度要求较高。 三、黏度法 黏度法：是测定高分子化合物分子量最常见的 方法之一，优点在于设备简单，操作 简便，耗时较少，精度较高。 常用的几个表示如下表： 1、黏度法原理： 高聚物分子量大小不一，参差不齐，一般在103～107 之间，所以通常所测高聚物的分子量是平均分子量。测定高聚分子量的方法很多，黏度法就就是其中一种比较好的方法。高聚物在稀溶液中的粘度，主要反映了液体在流动时存在着内摩擦。如果高聚物分子的分子量愈大，则它与溶剂间的接触表面也愈大，摩擦就大，表现出的特性粘度也大。测定其黏度就可以间接的测定出高聚物的分子量。 黏度法的缺点： 黏度法测量的是黏均分子量，且其的测定不是一种独立的测量方法，其中的[?]经验方程中