微生物学第6章微生物的生长parti1.pptVIP

* 微生物的群体生长很重要，那我们用什么样的技术手段来对他进行检测那，我们在第一节里先给大家介绍测定微生物繁殖的方法。 * 测生长量（微生物生长量和生理指标测定法） 直接法包括粗放的测体积法和精确的称干重法，其中测体积法就是将待测培养液放在刻度离心管中作自然沉降或进行一定时间的离心，然后观察沉降物的体积。而干重法相对比较准确，将一定量的菌液中的菌体通过离心或过滤分离出来，然后烘干(干燥温度可采用105℃、100℃或80℃)、称重。一般干重为湿重的10%～20%，而一个细菌细胞一般重约10-12～10-13g。例：大肠杆菌一个细胞一般重约10–12~10–13g，100ml培养物若得10~90mg干重的细胞。则液体培养物中细胞浓度达到2×109个/ml 。该法适合菌浓较高的样品 干重法多用于定量丝状真菌 * 间接法包括比浊法和测生理指标法，菌体在液体中生长，培养基会变得浑浊，利用分光光度计来衡量菌的密度。 ★方法：用分光光度计测定一系列已知浓度菌液的透光度，绘出标准曲线，测定未知菌液的透光度，从标准曲线上即可查出该菌液的浓度。 特点：快速、简便；但易受干扰。 用光密度（OD）在560nm波长处测溶液混浊度 这种方法在微生物的研究中应用比较广泛，利用在制作感受态细胞的时候，需要一定浓度的菌体细胞，我们一般就要边培养边测od值。否则菌太稀则做的感受态细胞很少，太稠则说明菌体生长已经过量，过了最佳的时期。 Figure: 06-12a Caption: Turbidity measurements of microbial growth. (a) Measurements of turbidity are made in a spectrophotometer or photometer. The photocell measures incident light unscattered by cells in suspension and gives readings in optical density or photometer units. * 蛋白质是细胞的主要物质，含量稳定，而氮是蛋白质的主要成分，通过测含氮量就可推知微生物的浓度。 除了利用菌液的浑浊度以外，还有一种是生理指标法。一般细菌含氮量为干重的12.5%，酵母菌为7.5%，霉菌为6.0%，根据一定体积培养液中的含氮量再乘以6.25，就可测得粗蛋白的含量: 自然界中蛋白质含氮量比较稳定，100g蛋白质平均含氮16g，因此由凯氏定氮法测出含氮量，再乘以系数6.25（即每含氮1g，就表示该物质含蛋白质6.25g） * 优点：简便，快捷，缺点：难以区分活细胞和死细胞；由于细胞过小，可能会在计数时漏掉；菌液体积需要调节；运动的细菌需要固定，现在也有用染色计数，利用活细胞染料可以区分死细胞和活细胞。 * 前面介绍的直接计数可以把活细胞和死细胞数目全都统计出来，但是很多时候，我们需要对样本中的活细胞数进行统计。 活细胞的特点是可以进行生长和分裂，所以利用这一特点， * Figure: 06-10 Caption: Two methods of performing a viable count (plate count). In either case the sample must usually be diluted before plating. * 优点 非常常用的活细胞计数方法 缺点 操作较繁琐 * 当然利用培养的方法进行计数，本身也有一些缺点，例如，培养基和培养条件是不是合适所有的微生物生长，不同的微生物生长速度也有差异，所以不同的培养时间所计的数也有不同， Figure: 06-11 Caption: Procedure for viable counting using serial dilutions of the sample and the pour plate method. The sterile liquid used for making dilutions can simply be water, but a balanced salt solution or growth medium may yield a higher recovery. The dilution factor is the reciprocal of the dilution. For spread plating (Figure 6.10), further dilutions may be necessary in order to spread samples of 0.1 ml. * 试样在进入二号瓶时被稀释了100倍，二号瓶中