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药物量效曲线及竞争性拮抗剂的pA2的测定
药物量效曲线及竞争性拮抗剂的pA2的测定
[适用对象] 药学、药剂学专业
[实验学时] 3学时
一、实验目的
学习激动剂量效曲线方法,计算竞争性拮抗剂的pA2值 实验原理在一定范围内药物随剂量或浓度的增加,效应也相应增加。以效应为纵坐标,剂量的对数值为横坐标,可绘制对称的“S”型曲线。本实验选择对M、N受体有兴奋作用的乙酰胆碱(Ah),应用蟾蜍腹直肌为标本(含N2受体)进行实验,按累积浓度进行实验,观察Ah剂量的增加,肌肉收缩效应的变化,从而绘制量效关系曲线。蟾蜍
器材氧气瓶、器官浴槽、铁支架、双凹夹、肌张力换能器、板、100μl微量注射器、10ml注射器、手术剪、眼科剪、眼科镊、培养皿、烧杯、丝线、计算机
10-4~10-1mol·L-1乙酰胆碱,10-3molL-1筒箭毒碱,任氏液
任氏液
2.标本制备与固定:取蟾蜍一只,断头处死,背位固定于蛙板上。剪开腹部皮肤,暴露腹直肌。在耻骨端及胸骨端,各以细线结扎,并自腹白线将两片腹直肌分离。将剪下的腹直肌标本,其一端固定于标本板固定钩上,迅速移至含有10ml任氏液的器官浴槽中,通入混合气体;另一端与张力传感器相连,调节微调器,使标本负荷1g,平衡0.5h,平衡期间每间隔15min更换一次营养液。 给药方法及曲线描记
按半对数摩尔浓度累积给药法,依次加入激动剂Ah,其方法见表:原始浓度(molL-1) 抽取量(μl) 浴槽终浓度(molL-1) 10-5 10 1×10-8 10-5 20 3×10-8 10-5 70 1×10-7 10-4 20 3×10-7 10-4 70 1×10-6 10-3 20 3×10-6 10-3 70 1×10-5 10-2 20 3×10-5 10-2 70 1×10-4 10-1 20 3×10-4 10-1 70 1×10-3 …… …… …… 按上述方法给药,当达到最小有效浓度后,每加一次药,将出现一次收缩,待收缩反应达最大时,立即加入下一剂量,直至加药后收缩反应不再增加,即达最大效应,即描记出Ah的量效曲线(第一条量效曲线)。连续用10ml营养液冲洗标本两次,再每间隔15分钟更换一次营养液,直至收缩张力恢复到正常(收缩张力曲线回至基线)。然后,加入拮抗剂筒箭毒碱10-3mol·L-1 30μl,即浴槽终浓度为3×10-6 mol·L-1。10min后按上述方法重复制作Ah第二条量效曲线。实验结果?? 1)从剂量反应曲线上求出未加入拮抗剂前激动剂引起mol·L-1),以[A0]表示。加入不同浓度筒箭毒碱ACh的剂量反应曲线右移。从曲线上求出筒箭毒碱ACh产生50%反应所需的浓度(mol·L-1),以[AB]表示。
2)pA2值的计算
的注意事项标本勿用手拿,应以镊子取,亦不能在空气中暴露久,以免失去敏感性。
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