艾滋病感染实验室检测教材幻灯片.pptVIP

2005.11.21－11.25浙江省艾滋病抗病毒治疗培训班 2005.11.21－11.25浙江省艾滋病抗病毒治疗培训班 艾滋病感染实验室检测 浙江省疾控中心 HIV检测目的 1.临床诊断 2.安全输血 3.流行病学调查、高危人群监测 4.自愿咨询检测VCT 5.抗病毒治疗后实验室检测 6.抗病毒治疗耐药性检测 7.免疫功能测定 HIV感染的实验室检测方法 常用HIV病原学检测方法: 1. 核酸检测（ cDNA测定-PCR、 RNA测定-病毒载量） 2. 病毒培养分离 3. P24抗原检测 常用HIV抗体检测方法: 初筛：1.酶联免疫吸附法 ELISA：第三代、第四代 2.快速检测 RT：金标、硒标 3.简单法 PA: 明胶颗粒凝集 确证：免疫印迹法 WB:（Western Blot）、RIBA 其他相关检测方法: 免疫功能测定：CD4/CD8检测 （一）HIV核酸检测 1. HIV核酸定性检测：通常使用PCR或 RT-PCR技术，用于HIV感染的辅助诊断。 2. HIV核酸定量检测：使用RT-PCR, NASBA, bDNA等技术，常用于监测HIV感染者的病程进展和抗病毒治疗效果。 NASBA 引物1 逆转录酶 RNA酶H 逆转录酶 引物 2 T7 RNA多聚酶 引物 2 逆转录酶 逆转录酶 RNA酶 H 引物1 liniar phase amplification phase PCR反应图解 bDNA HIV 核酸检测的反应原理 核酸检测主要应用： 1）?早期诊断围产期HIV感染的辅助诊断： 宫内感染（检测定义）： 新生儿出生48小时内，检测到病毒核酸，或病毒培养阳性，则提示孕期（宫内）感染。 对围产期感染儿童在18月龄前的早期诊断，目前以2次核酸检测结果作为辅助诊断的依据。2次不同时间的样本核酸检测均为阳性提示为HIV感染，均为阴性提示未感染。同时18个月时做抗体检测，当18个月HIV抗体确证阳性方可诊断 HIV感染。 核酸检测主要应用： 2）对18个月婴儿HIV抗体WB试验的不确定（或可疑）结果进一步做辅助诊断； 3）在HIV抗体未产生之前（窗口期）辅助诊断急性原发感染； 4）HIV亚型分析；确定人群中HIV的变异； 5）监测临床抗病毒药物治疗效果； 6）检测病毒的耐药性突变。 （二）HIV病毒分离培养 将病人淋巴细胞与正常人的淋巴细胞共同培养，适当周期培养后测定培养液HIV p24抗原/RT，从而判断病人的淋巴细胞是否受到HIV感染。 细胞培养与血清学方法相比，专一性很强，不会出现假阳性。但其敏感性不如血清学或PCR。 必须在P3级生物安全实验室进行。 （四）HIV抗体检测 检测抗-HIV抗体是HIV/AIDS诊断的一项重要指标，抗-HIV抗体测定作为血清学诊断要求准确、可靠，必须经初筛、复检试验和确认实验三个步骤。 初筛实验方法主要有：酶联免疫试验（ELISA）、明胶颗粒凝集试验（PA）、快速免疫（层析或渗滤）试验（RT）。 确认试验主要用免疫印迹试验（ WB）。 抗体检测的目的 1.输血和移植安全（为了接受者的安全） 2.监测(为了知晓人群流行状况) 3.临床HIV疾病的诊断和VCT检测 (为了知晓个体感染状况） 为了达到以上的某个目的的HIV 检测可能不适合其他目的，比如输血服务的检测不适合临床诊断HIV感染 固相 血清标本 酶标记物 Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y 1、酶联免疫吸附法ELISA原理 第一、二代 第三代 第四代 infectivity = 4th 代 3rd 代 = = 1st-2nd 代 HIV 抗原 IgM 抗体 IgG 抗体 检测线 = 窗口期 HIV感染窗口期 2、快速检测试验（RT） 快速HIV试剂的原理* 颗粒凝集 （Particle Agglutination, PA) 免疫渗漏 （Immunoconcentration, Flow through, FT) 免疫层析 （Immunochromatograpy, lateral flow, IF) 目前在国内批准注册的国外进口试剂有：Determine HIV1/2（ABBOTT，雅培）、Instant CHEK-HIV1+2（EY）、麦美华、中新科炬 一般10-30min内出结果。 2003年国内已有