肠道致病菌的检验与鉴定教材幻灯片.pptVIP

(1)三糖铁培养的培养 典型沙门氏菌在三糖铁培养上的特征: 表面(-)粉红色、底层(+)黄色、 H2S (+)底层有黑色、有动力。 在TSI培养基中:表面(+)黄色、 H2S (-)的培养物可排除,其它培养物均有可能是沙门氏菌。 (2)其余四项生化实验 靛基质 PH7.2尿素酶 KCN 赖氨酸脱羧酶 反应序号:A1、A2多见,B1少见 (3)、典型沙门氏菌的五项生化反应及其检验的利用 A、典型五项生化反应:A1 H2S(+) 靛基质(-) PH7.2尿素酶(-) KCN(-) 赖氨酸脱羧E(+) B、利用五项生化反应鉴定沙门氏菌的最简单方案 a、对于H2S阳性菌,利用五项生化反应试验可判别沙门氏菌和柠檬酸杆菌。 b、对于H2S阴性菌,查到B1时即: H2S(-) 靛基质(-) PH7.2尿素酶(-) KCN(-) 赖氨酸脱羧E(+),补做ONPE试验,可判定沙门氏菌属和埃希氏菌属(ONPE(-)为沙门氏菌,ONPE(+)大肠艾希氏菌 5、血清学试验(最后鉴定) (1)、沙门氏菌诊断血清的种类: 10种组合血清:主要用于伤寒和副伤寒沙门氏菌鉴定 26种组合血清:常见致病菌的定群与分型 57种组合血清:常见定型,初步鉴定A—F群以外的菌型 144种组合血清:全套装 (2)、血清学检验步骤 抗原准备→ → A—F多价血清检验(判定是否是沙门氏菌)→ →群特异性抗体血清(如O2、O4、O3、O7、O8、O9、O10、O11(判定O群别) → →O单因子血清检查 → →H因子血清检查(分型)→ →报告 五、检验结果的报告 1、凡血清学鉴定与生化反应均符合者,报告发现沙门氏菌。 经检验,×××食品发现有沙门氏菌 2、凡血清学鉴定与生化反应均不符合者,报告未发现沙门氏菌。 思考题: 1、典型沙门氏菌的五项生化试验结果如何? 2、沙门氏菌的形态特征,培养特性是什么? 3、沙门氏菌检验时为什么要进行前增菌和增菌? 4、沙门氏菌有哪些抗原?各有何特点?O、H抗原如何表示,A—F群沙门氏菌中,代表每群O特异性抗原的独特因子是什么? 5、沙门氏菌哪几个菌型具有Vi抗原,Vi抗原对O抗原血清涟试验有何影响,对含Vi抗原菌,如何做O抗原血清学试验。 6、沙门氏菌在SS平板,TSI培养基上生长的现象如何,说明其原理。 7、分离纯化后怎样选用最少的生化试验方法初步鉴定检验菌是否是沙门氏菌属的细菌。 8、如何进行沙门氏菌的血清学试验。 第三节、志贺氏菌的检验 一、生物学特性 (一)、形态与染色 革兰氏阴性短杆菌、无荚膜,无芽胞,无鞭毛 2~3um*0.5~0.7um (二)、培养特性 1、需氧或兼氧性厌氧,最适温度37℃,PH7.2~7.4 2、在普通琼脂和SS平板上,能形成圆形、微凸、光滑湿润、无色半透明、边缘整齐、在中等大小的菌落 3、宋氏志贺氏菌菌落较大,较不透明,粗糙而扁平,在SS平板上可迟发酵乳糖,菌落呈玫瑰红色。 4、在肉汤中呈均匀混浊生长,无菌膜。 (三)、生化反应 1、发酵葡萄糖,产酸不产气,除宋氏志贺氏菌外,均不发酵乳糖。 2、不发酵侧金盏花醇、肌醇、水杨苷。 3、不产生H2S,不分解尿素,V-P试验阴性,不能利用柠檬酸盐。 4、甲基红阳性。 (四)、抗原结构 1、抗原构成: O抗原: 群特异性抗原:A、B、C、D K抗原:除B群外,一般有K抗原 2、志贺氏菌的分群与血清型 志贺氏菌分为四群: A群(痢疾志贺氏菌):1~10型 B群(福氏志贺氏菌):1~6型+X、Y两个变种, C群(鲍氏志贺氏菌 ):1~15型 D群(宋内氏志贺氏菌) :1个型 志贺氏菌属抗原的分类 菌 名 血 清 分 类 生 化 特 性 群 型 亚 型 甘露醇 鸟氨酸脱羧酶 志贺氏菌 A 1 ～ 10 　 － - 福 氏 菌 B 1～6 x、y变种 1a、1b、2a、2b、3a、3b 3c、4a、4b + - 鲍 氏 菌 C 1 ～ 15 　 + - 宋内氏菌 D 1 　 + ＋ 葡萄糖+ 乳糖- 甘露醇- 痢疾志贺氏菌1、3、4、5、6、9、10型 痢疾志贺氏菌2、7、8型 福氏6型,鲍氏1、2、3、4、5、6、8、10、12、14型 福氏痢疾菌(1、2、3、4、5型)鲍氏5、7、9、11、13、15型 靛基质- 乳糖+ 宋氏志贺氏菌 靛基质- 靛基质+ 靛基质- 靛基质+ 甘露醇+ 3、属内外抗原关系 (1)群内抗原关系: A群:2与10型,具有密切关系 C群:1与4和11