6-1生长-生长曲线.ppt

第六章 微生物的生长及其控制 主要内容： 第一节 测定生长繁殖的方法 第二节 微生物的生长规律 第三节 影响微生物生长的主要因素 第四节 微生物培养 第五节 有害微生物的控制 生长与繁殖的概念 生长——微生物细胞吸收营养物质，进行新陈代谢，当同化作用＞异化作用时，生命个体的重量和体积不断增大的过程。 繁殖——生命个体生长到一定阶段，通过特定方式产生新的生命个体，即引起生命个体数量增加的生物学过程。 发育——从生长到繁殖，是生物的构造和机能从简单到复杂、从量变到质变的发展变化过程，这一过程称为发育。 个体与群体生长 个体生长——微生物细胞个体吸收营养物质，进行新陈代谢，原生质与细胞组分的增加为个体生长。 群体生长——群体中个体数目的增加。可以用重量、体积、密度或浓度来衡量。 第一节 测定生长繁殖的方法 一、测生长量 适用：适用于一切微生物。 （一）直接法 测体积法：在刻度离心管中测沉降量 秤干重法：直接秤干重 （二）间接法 比浊法：如分光光度法 生理指标法：测含氮量法、测含碳量法、测磷、DNA、RNA、ATP、DAP（二氨基庚二酸）、几丁质、产酸、产气、呼吸强度、耗氧量、酶活性、粘度、产热等。 二、计繁殖数 方法： 血球计数板 计数室：面积1mm2、高度0.1mm；有400个计数小格； 直接计数法的操作 数个数： 间接计数法（活菌数） 1、平板菌落计数法 适用：各种好氧菌或厌氧菌 方法：把稀释后的一定量菌样通过浇注（平板）或涂布（平板）的方法，让其内的微生物单细胞一一分散在琼脂平板上（内），待培养后，每一活细胞就形成一个单菌落，即“菌落形成单位”（cfu），根据每皿上形成的cfu数乘上稀释度推算出菌样的含菌数。 缺点：操作繁琐、技术要求高。 改进：国外已出现多种微型、快速、商品化的用于菌落计数的小型纸片或密封琼脂板。 间接计数法（平板） 计算：每ml原菌液活菌数＝同一稀释度三皿平均菌落数×稀释倍数×5 间接计数法 2、厌氧菌的菌落计数法 亨盖特滚管培养法：设备复杂、技术难度高。 半固体深层琼脂法：适于双歧杆菌、乳酸菌等厌氧菌活菌数的测定。 第二节 微生物的生长规律 同步培养：即设法使某一群体中的所有个体细胞尽可能都处于同样细胞生长和分裂周期中，然后通过分析此群体在各阶段的生物化学特性变化，来间接了解单个细胞的相应变化规律。 同步生长：通过同步培养的手段而使细胞群体中各个体处于分裂步调一致的生长状态，称为同步生长。 同步细胞：用同步培养方法获得的细胞称为同步细胞或同步培养物。 (1)控制温度 (2)控制培养基成分 (3)其他方法 2、机械筛选法 根据微生物细胞在不同生长阶段的细胞体积与质量或根据它们同某种材料的结合能力不同的原料设计的方法： (1)离心分离法 －密度梯度梯度离心法 原理：将不同步的细胞培养物悬浮在某种不同密度梯度的溶液中，进行密度梯度离心，使不同生长期的细胞悬浮在不同的位置。 (2)过滤分离法 原理：用微孔滤器将细胞培养物进行过滤，使大小不同的细胞分开，从而获得不同细胞。 (3)硝酸纤维素滤膜法 硝酸纤维素滤膜法过程 第一：菌悬液通过微孔滤膜，细胞（电荷与滤膜相反）吸附其上； 第二：反置滤膜，以新鲜培养液慢速通过滤膜，洗掉浮游细胞； 第三：除去起始洗脱液后就可以得到刚刚分裂下来的新生细胞，即为同步培养。 第四：分部收集洗脱液。 二、单细胞微生物的典型生长曲线 --细菌群体生长的规律 生长曲线：微生物培养过程中，不补充营养物质或不移去培养物，保持整个培养液体积不变，以时间为横坐标，以菌数为纵坐标，绘制的一条能反映细菌在培养期间菌数变化规律的曲线，称为生长曲线。 生长曲线 生长曲线可分为四个时期： (一)延滞期 1、特点：----适应新环境 ①细菌未分裂，数量维持恒定，生长速率为0； ②细胞体积大，杆状可长成丝状； ③RNA特别是rRNA有所增加，原生质呈碱性； ④合成代谢旺盛，如核糖体、酶类、ATP等合成加快； ⑤对外界不良条件敏感。 （二）对数生长期--指数生长期 1、特点： (1)细胞数目以几何级数增加，其对数与时间呈直