基因工程的酶学基础教材_课件.pptVIP

用途: 1. 催化[α-32P]-3’-脱氧核苷酸标记DNA片断的3’ 末端。可用于测序的终止,一位不含游离的3’-OH末端。 2. 催化非放射性的标记物掺入到DNA片断的3’-末端: 生物素等,掺入后可产生荧光染料或抗生物素蛋白结合物的接受位点。 3. 用于在平头ＤＮＡ上合成一段寡聚核苷酸,从而形成粘性末端。 碱性磷酸酶: 来自于大肠杆菌(bacterial alkaline phosphatase BAP)或小牛肠(calf intestinal alkaline phosphatase CIP),该酶用于脱去DNA(RNA)5’末端的磷酸根,使5’-P成为5’-OH,该过程称核酸分子的脱磷酸作用。当需要5’端同位素标记或为了避免DNA片段自身连接(或环化)时可进行脱磷酸反应。 S1核酸酶: 来自于稻谷曲霉,该酶只水解单链DNA,用于将粘性末端水解成平末端及cDNA发夹式结构的处理。 反转录酶(reverse transcriptase)  这类酶来自于反转录病毒,它可以RNA为模板,催化合成ＤＮＡ。目前常用的有禽源(AMV)及鼠源(M-MLV)反转录酶两种。 体外连接的三种方式: 1. 用ＤＮＡ连接酶连接具有互补粘性末端的DNA片断 2. 用Ｔ４ＤＮＡ连接酶将平末端的DNA片断连接;或是用