土壤中砷氧化细菌的分离及其培养条件研究-中国生态系统研究网络.PDFVIP

2009 年2 月 广西轻工业 第2 期（总第123 期） GUANGXI JOURNAL OF LIGHT INDUSTRY 资源与环境 土壤中砷氧化细菌的分离及其培养条件研究 1 1 2 1，2 1 莫于婷 ，宋卫锋 ，孙国萍 ，宾丽英 ，张倍维 （1 .广东工业大学环境科学与工程学院，广东广州51 0006；2.广东省微生物研究所，广东广州 51 0070） 【摘 要】 通过外加砷源驯化肇庆市鼎湖山自然保护区土壤中细菌，采用富集、稀释平板、硝酸盐漫过方法从土壤中分离出 2 株砷氧化细菌。氧化砷实验表明：As- I 、As- Q 能高效将As(Ⅲ)氧化为As( Ⅴ)，其氧化率可达99 ％。培养条件研究表明，2 菌株最适 生长温度为30℃，As- I 、As- Q 最适生长pH 分别为8 和7。 【关键词】 土壤；砷；硝酸银；砷氧化菌 【中图分类号】 Q939.96 【文献标识码】 A 【文章编号】 1003- 2673(2009)02－83 －02 砷（As）是自然界中普遍存在的一种具有致癌性、毒性强且 平板，静置2 小时以上,如培养基中菌落边缘变褐色或褐红色， 有积累性中毒作用的类金属元素[1]。砷（As）在许多行业中广泛 则可初步断定为抗砷氧化菌[6]。 应用、通过开采、加工、使用、废弃等过程使其大量残留在土壤 收集抗砷氧化菌体,经革兰氏染色后在光学显微镜下观察 中，造成土壤中砷（As）污染普遍存在。土壤中砷（As）积累到一 并摄影。 定程度，可导致土壤退化、农作物产量及品质下降,甚至通过食 2.2 菌株砷氧化功能的确定 物链途径危害人体健康，因而砷污染土壤的治理刻不容缓。在 挑取菌株在 100mg/L 的As(III)培养基中30℃摇床培养至 土壤中砷（As）主要以离子形式存在，有As(Ⅲ)与As(Ⅴ)两种价 对数期（约24h），6000rpm 离心取菌体，用0.01M pH6.8 的 态，而三价砷As(Ⅲ)比五价砷As(Ⅴ)毒性高约100 倍[2]。研究表 Tris- HCl 缓冲液洗涤菌体，振荡—离心—取菌体，重复2- 3 明，砷污染土壤中随着有机质的增加，As(Ⅴ)含量降低,As(Ⅲ)含 次，再将菌体接种到含As(III)100mg/L 的培养基中，30℃恒温 量增加[3] 。 自然界中As(III)的氧化主要由As(III)氧化细菌参与 震荡培养，每隔2- 3h 取样，样品离心取上清液并在85℃水浴 和驱动，而砷的非生物(化学)氧化过程非常缓慢,如细菌Ther- 灭活处理 10min。 采用氢化物发生 - 原子荧光光谱法 mus 氧化As(III)的速度比非生物氧化速度高100 倍[4] 。为寻求 （HG- AFS）测定上清液中总砷（As）和As （Ⅲ）。 环保、高效、无二次污染治理砷污染土壤方法,本文从外加砷源 2.3 菌株对As(Ⅲ)和As( Ⅴ) 的耐受性 的土壤中筛选出砷氧化细菌，为微生物法治理砷污染土壤提供 以相同接种量分别置于含As ( Ⅲ)、As ( Ⅴ)500mg/L、 理论依据。 1000mg/L、1500mg/L、2000mg/L 培养基中30℃摇床培养24h, 用紫外可见光分光度计在600nm 处测吸光度值OD600, 以砷浓 1 材料 度为横坐标, 以吸光度值OD600 为纵坐标,绘制菌株耐砷浓度— 1.1 菌株来源 菌数柱状图。 采自广东省肇庆市鼎湖山自然保护区土壤。