生物分离工程-第二章初处理-沉淀及泡沫分离2009.ppt

第二章 初处理-沉淀及泡沫分离 初级分离概念 初级分离特点 分离对象：体积大、杂质含量高； 分离技术：低操作成本、适于大规模生产 第一节 沉淀 概述 蛋白溶解的因素 各种沉淀方法 盐析 有机溶剂沉淀 等电沉淀 聚合物沉淀 其它沉淀方式 沉淀动力学 1.1 概述 概述 优点 A、设备简单、成本低、放大容易，产物浓度越高沉淀越有利，收率越高； B、原料液体积很快地减小10~50倍，从而简化生产工艺、降低生产费用； C、用沉淀法作为色谱分离前处理（避免堵住色谱柱），可使使用色谱分离的限制因素降低到最少。 缺点： 沉淀物可聚集有多种物质（聚合过快包络了一些溶液和杂质），如大量盐类和溶剂，所以沉淀法所产品纯度通常都比结晶法低； 沉淀法的分类 1.2.1蛋白质溶解因素-斥力 不同离子浓度下的分子引力 盐析沉淀-盐析原理 低离子强度下的盐溶 向蛋白质的纯水溶液中加入电介质后，蛋白质将吸附盐离子，而形成扩散双电层（产生分子间相互排斥作用）导致蛋白质的溶解度增大，发生盐溶 高离子强度下的盐析 溶液主体中那些与扩散层反离子电荷符号相同的电解质离子将把反离子压入（排斥）到双电层中 由于盐的水化作用，其将争夺蛋白质水化层中的水分子，使蛋白质表面疏水区脱水而暴露，增大它们之间的疏水性作用 1.2.3蛋白质溶解因素-水膜 在水溶液中，多肽链中的疏水性氨基酸残基具有向内部折叠的趋势，使亲水性氨基酸残基基本分布在蛋白质立体结构的外表面。 即便如此，一般仍有部分疏水性氨基酸残基暴露在外表面，形成疏水区。 水膜形成在于蛋白表面亲水基团与水分子作用，“水化”而成。 水膜形成因素： 有利因素：亲水性，包括氢键、极性基团、离子化侧链、亲水氨基酸所占的百分比等。 不利因素：疏水性，包括暴露的疏水基团、疏水氨基酸所占的百分比等。。 1.3 各种沉淀方法 1.3.1 蛋白质盐析 盐析沉淀-盐析原理图示 Cohn方程式 Cohnx 经验式（用浓度代替离子强度） 其它描述方法 还有如下要求： 1）溶解度大：利于配高离子强度盐溶液； 2）溶解受温度影响小：利于低温操作； 3）盐溶液密度低：便于蛋白沉降； 4）盐析用盐必须是惰性的 5）来源丰富、经济 常用盐有硫酸铵，其优点和缺点为： （1） 价廉 ；（2） 溶解度大，稳定蛋白质 ；（3）水解变酸；（4）高氨，影响蛋白测定（5）缓冲能力差，不能低于pH8使用；（6）残留产品有影响。（脱盐可用透析、超滤和凝胶柱） 次常用Na2SO4。缺点：在40C以下溶解度较低，主要用于热稳定蛋白 1.3.3有机溶剂沉淀法 常用的有机溶剂沉析剂 选择依据：不会对蛋白产生变性；溶解度高；介电系数小；毒性小，容易回收 乙醇：沉析作用强，挥发性适中，无毒常用于蛋白质、核酸、多糖等生物大分子的沉析； 丙酮：沉析作用更强，用量省，但毒性大，应用范围不广； 特点： 介电常数小，60%乙醇的介电常数是48 丙酮的介电常数是22 容易获取 有机溶剂沉淀法操作注意事项 1.3.5 聚电解质沉淀 1.3.7 选择性变性沉淀法 利用蛋白质、酶、核酸等生物大分子对某种物理或化学因素的敏感性差异，实现分离。 加入变性剂 选择性热变性 选择性酸碱变性 使用时需慎重，目标蛋白很稳定时方可用！ 蛋白变性后沉淀：蛋白分子变性后，蛋白分子内疏水键打开，与其它分子疏水键形成新的疏水键，从而形成分子量更大的复合大分子 要区别凝絮和变性沉淀区别，凝絮过程中也有大分子复合物产生，主要是凝絮剂起架桥作用把蛋白集合在一起（如聚电解质沉淀法，聚阳离子壳聚糖作废水澄清剂法，都是凝絮法） 变性动力学符合一级衰减动力学（公式见课本P43)。 1.4 沉淀生成动力学 ①热运动，Bromnian运动； 布朗离子的扩散控制，发生异向聚集（二级生长动力学） ②对流运动，由机械搅拌产生； 对于大于1微米的离子，主要受液体剪切作用，颗粒间相互碰撞，发生同向聚集。（二级生长动力学） 具体速度系数 第二节 泡沫分离 泡沫分离原理 泡沫分离设备和操作 泡沫分离因素 2.1泡沫分离原理 泡沫分离(Foam Separation)又称泡沫吸附分离(Foam Separation Adsorbent)技术，早在1915年就开始应用于矿物浮选 20世纪50年代末首先是从溶液中回收金属离子的课题开始，前期研究了泡沫分离金属离子的可行性 20世纪60年代中期采用泡沫分离法脱除洗涤剂工厂排放的一级污水和二级污水中的表面活性剂－直链烷基磺酸盐和苯磺酸盐获得成功 1977年泡沫分离DNA、蛋白质及液体卵磷脂