苹果树木质部及韧皮部组织基因组DNA的提取及质量-江苏农业科学.PDFVIP

— ３６— 江苏农业科学　２０１５年第４３卷第４期 刘钰娇，杨金凤，赵　璐，等．苹果树木质部及韧皮部组织基因组ＤＮＡ的提取及质量检测［Ｊ］．江苏农业科学，２０１５，４３（４）：３６－３８． ｄｏｉ：１０．１５８８９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００２－１３０２．２０１５．０４．０１１ 苹果树木质部及韧皮部组织基因组ＤＮＡ的提取及质量检测 刘钰娇，杨金凤，赵　璐，王亚南，胡同乐，王树桐，曹克强 （河北农业大学植物保护学院，河北保定０７１０００） 　　摘要：苹果树木质部及韧皮部中含有大量的酚类、多糖等次生代谢物质，严重影响基因组 ＤＮＡ提取的得率和纯 度。采用３种不同方法，即改良的ＣＴＡＢ法、快速盐提法、试剂盒法，从苹果树木质部及韧皮部提取基因组ＤＮＡ，并通 过琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度法检测所提取基因组ＤＮＡ的质量。结果表明，改良的ＣＴＡＢ法提取的组织基因组 ＤＮＡ不论是浓度、质量还是随机引物ＰＣＲ扩增效果均能够满足进一步分子试验需要，而改进的快速盐提法和试剂盒 法提取得率太低，不能用于分子生物学研究。因此改良的ＣＴＡＢ法是适合苹果树木质部及韧皮部组织基因组ＤＮＡ提 取的最佳方法。 　　关键词：苹果；韧皮部；木质部；基因组ＤＮＡ；提取 　　中图分类号：Ｓ４３６．６１１　　文献标志码：Ａ　　文章编号：１００２－１３０２（２０１５）０４－００３６－０３ 　　苹果属于蔷薇科（Ｒｏｓａｃｅａ）仁果亚科（Ｐｏｍｏｉｄｅａ）苹果属 ［１４ｍｏｌ／ＬＮａＣｌ，１ｍｏｌ／ＬＴｒｉｓ－ＨＣＬ（ｐＨ值８．０），２０ｍｍｏｌ／Ｌ （ＭａｌｕｓＭｉｌｌ．）植物，在我国有悠久的栽培历史。最新的统计 ＥＤＴＡ，２％ ＣＴＡＢ，２％ ＰＶＰＰ，２％ －巯基乙醇］６５０ Ｌ，涡旋 β μ ２ 数据显示，２０１２年，我国苹果栽培面积达到２０６万ｈｍ，产量 混匀，６５℃水浴１ｈ，每隔１０ｍｉｎ轻轻颠倒离心管 １次，使研 ［１］ ３７００万ｔ，我国已经成为世界上最大的苹果生产国 。我国 磨后的粉末和抽提缓冲液充分混匀。向离心管中加入 苹果上的枝干病害如苹果树腐烂病、轮纹病等严重影响苹果 ６５０ Ｌ的酚－氯仿－异戊醇（体积比２５∶２４∶１），涡旋混匀， μ 树的生长及产量，从分子水平研究枝干病害对病害的正确诊 并于４℃、１２０００ｒ／ｍｉｎ离心１５ｍｉｎ。将上清液转移至一个新 断、病菌的分布以及有效防治策略的制定有十分重要的意义。 的离心管中，向其中加入等体积的氯仿混均匀，于 ４℃、 植物ＤＮＡ的提取方法在很多文献中都有大量报道［２－５］，而苹 １２０００ｒ／ｍｉｎ离心１０ｍｉｎ。吸取上清液转移至另一新的离心 果树木质部及韧皮部中含有大量的酚类、多糖等次生代谢物 管中，向其中加入６０ Ｌ的３ｍｏｌ／ＬＮａＡｃ，和２００ Ｌ异丙醇， μ μ 质，严重影响基因组ＤＮＡ提取的得率和纯度。本试验对改良 混合均匀，－２０℃放置１ｈ，１２０００ｒ／ｍｉｎ离心１０ｍｉｎ，倒出上 的ＣＴＡＢ法、快速盐提法、试剂盒法这３种提取总ＤＮＡ的方 清液。用３００ Ｌ冷冻保存７０％乙醇清洗沉淀２次，无水乙醇 μ 法进行比较分析，试图确立适于苹果树木质部及韧皮部基因 冲洗 １次，最后于室温条件下干燥，向离心管中加入 １００ Ｌ μ 组ＤＮＡ提取的最佳方法，以便于进行枝干病害的分子生物学 ＴＥ（