第五章反胶团萃取与双水相萃取2.ppt

概述 双水相体系 双水相萃取原理 双水相萃取的应用 §1 概述 问题的提出：常规的分离方法 萃取是最常用的一种液液分离方法，在制药和化工行业应用极为普遍，但是普通的有机溶剂萃取法由于以下原因难于应用于蛋白质分离: (1)许多蛋白质都有极强的亲水性，不溶于有机溶剂; (2)蛋白质在有机溶剂相中易变性失活。 大部分生物制品的原液是低浓度和有生物活性的，需要在低温或常温条件进行富集、分离，因而常规的萃取技术在这些领域中的应用受到限制。双水相体系就是考虑到这种现状，基于液液萃取理论同时考虑保持生物活性所开发的一种新型的液液萃取分离技术。 双水相萃取技术的优点 作为一种新型的分离技术，克服了常规萃取有机溶剂对生物物质的变性作用，提供了一个温和的活性环境，在萃取过程中具有保持生物物质的活性及构象等明显的技术优势。 双水相萃取技术的缺点 易乳化、相分离时间长，成相聚合物的成本较高，水溶性高聚物大多数黏度较大，不易定量控制；水溶性的高聚物难以挥发，使反萃必不可少，高聚物回收困难等。 §2 双水相体系 2.1 双水相的形成机理 2.1.1 概念 双水相形成的机理 某些有机物之间或有机物与无机盐之间，在水中以适当的浓度溶解后形成互不相溶的两相或多水相体系。 右图中是聚乙二醇6000（PEG6000）和葡聚糖（Dextran500）两种聚合物形成的双水相。聚乙二醇和葡聚糖以不同比例分配在上下两相中，两相中水的含量都很高。 从溶液理论上说，当两种或多种有机物和水溶液相互混合时，是分层还是混合成一相，取决于混合时熵变和分子间的相互作用。 双水相体系的熵很难准确计算； 分子间的作用力也不清楚。 聚合物的不相容性：两种高聚物分子间如有斥力存在，在达到平衡后就有可能分成两相，两种高聚物分别富集于不同的两相中。（双水相形成的依据） 2.1.3 双水相的成相原因: 空间阻碍作用 根据热力学第二定律可知，混合是熵增加的过程，因而可自发进行。 另一方面，分子间存在相互作用力，并且这种分子间相互作用力随相对分子质量的增大而增大。 当两种高分子聚合物之间存在相互排斥作用时，由于相对分子质量较大，分子间的相互排斥作用与混合过程的熵增加相比占主导地位，一种聚合物分子的周围将聚集同种分子而排斥异种分子，当达到平衡时，即形成分别富含不同聚合物的两相。 在双水相体系中，两相的水分都占85％～95％，且成相的高聚物和无机盐一般都是生物相容的，生物活性物质或细胞在这种环境中不仅不会失活，而且还会提高它们的稳定性，因此双水相萃取体系正越来越多地被用于生物技术领域。 2.2 相图 把双水相体系中的组成成分，分别以不同的浓度相混，然后观察其成相过程，把此过程以图的形式描绘下来，即称为此种双水相体系的相图。 不同的双水相体系，其成相条件是不同的，相图常被用于研究不同双水相体系中的成相现象。 B相和C相质量之比等于系线上CA与AB的线段长度之比。又由于两相密度相差很小(双水相体系上相和下相密度常在1.0～1.1kg／dm3之间)，故上下相体积之比也近似等于系线上CA与AB线段长度之比，即： 双水相系统相图的测定 可由实验来测定。 将一定量的高聚物P浓溶液置于试管内，然后用已知浓度的高聚物Q溶液来测定。 随着高聚物Q的加入，试管内的溶液由均相突然变浑浊。记录高聚物Q的加入量。 然后再在试管内加入1ml水，溶液变澄清，继续滴加高聚物Q，溶液又变混浊，记录高聚物Q的加入量； 以此类推，由实验可测定出一系列双节线上的平衡组成，进行数据整理，计算出各组数据； 以高聚物P的浓度对高聚物Q的浓度作图，即可得到双节线。相图中的临界点K是系统上相、下相组成相同时由两相转变为均相的分界点。 §3 双水相萃取原理 与液液萃取原理相似，依据物质在两相间的选择性分配，但萃取体系的性质不同。 当物质进入双水相体系， 依据悬浮粒子与其周围物质具有的复杂的相互作用： 氢键 电荷力 疏水作用 范德华力 构象效应 在上相和下相间进行选择性分配，分配系数比常规的萃取要大得多或小得多。 双水相中的分配平衡 溶质在双水相中的分配系数（服从Nernst分配定律）： 3.2 影响物质分配平衡的因素 影响物质在双水相系统巾分配的主要因素有：组成双水相体系的高聚物类型；高聚物的平均分子量和分子量分布；高聚物的浓度；成相盐和非成相盐的种类；盐的离子强度；pH值。 适宜的工艺条件主要通过实验方法得到。 这些因素直接影响被分配物质在两相的界面特性和电位差，并间接影响物质在两相的分配。通过选择合适的萃取条件，可以提高生物物质的收率和纯度，也可以通过改变条件将生物物质从双水相体系中反萃出来。 (1)高聚物的分子量 在高聚物浓度保持不变的前提下，降低该高聚物的分子量，被分配的可溶性生物