[生物学]第二章菌种选育.ppt

第二章 菌种的选育、保藏与复壮 第一节、微生物工业用菌种? 第二节、菌种的来源 第三节、菌种的选育 第四节、菌种保藏 第五节、菌种的提纯与复壮 第一节、微生物工业用菌种 一、微生物工业对菌种的要求 微生物资源丰富，广布于土壤、水和空气等自然界中，其中土壤中最多。 发展趋势： 从野生型 变异株 自然选育 代谢控制育种 诱变育种 基因工程定向育种 微生物工业对大规模生产用菌的要求原则： （1）所需培养基易得，价格低廉； （2）培养和发酵条件温和（糖浓度、温度、pH、溶解氧、渗透压等） （3）生长速度和反应速度较快，发酵周期短 （4）单产高 （选择野生型、营养缺陷型或调节突变株） （5）抗病毒能力强 （6）菌种纯粹，不易变异退化，稳定性好 （7）菌体不是病源菌，不产生任何有害的生物活性物质和毒素（包括抗生素、激素和毒素），保证安全 二、工业上常用的微生物 微生物在工业上的用途很广，包括化工、医药、食品、水产、国防、纺织、石油勘探及石油化工等方面。 微生物的代谢产物多，已超过1300多种，而用于大规模工业生产的不足100多种；微生物酶有近千种，而工业上用的不过40－50种。微生物具有巨大的潜力可挖掘。 工业上常用菌种举例： 乳酸杆菌 应用：乳酸、干酪、奶子酒、发面、泡菜、酸奶等的制作 枯草芽孢杆菌 应用：生产淀粉酶 2、酵母菌 种类：酒精酵母、啤酒酵母、假丝酵母 红酵母、面包酵母。 应用：生产酒精、啤酒、石油发酵脱蜡和制取蛋白质、生产脂肪。 3、霉菌 曲霉属 应用：生产有机酸、生产淀粉酶、果胶酶、葡萄糖氧化酶 应用：酱油、酱类（淀粉酶） 应用：生产甲义丁二酸 米曲霉 应用：产糖化酶和蛋白酶、主要用于酿酒制曲和酱油制曲 毛 霉 应用：可以产生蛋白酶，我国多用于豆腐乳、豆豉等的制作 根霉 种类：米根霉、华根霉、少根根霉、爪哇根霉 应用：酿酒 青霉菌 4、放线菌 种类：龟裂链霉菌、金霉素链霉菌、灰色链霉菌、红霉素链霉菌 应用：各类抗生素。土霉素、四环素、链霉素、红霉素 第二节 菌种的来源 一、微生物选择性分离方法 含微生物材料的选择 材料的预处理 所需菌种的分离 菌种的培养 菌种的选择和纯化 1、含微生物材料的选择 微生物主要来自土壤 寻找已经适应苛刻环境压力的微生物类群 例如：从盐场分离嗜盐链霉菌，从污泥中分离甲烷菌，从酒糟中分离酵母菌等。 2、材料的预处理（物理、化学、诱饵法） 通常采用热处理方法减少材料中的细菌数，但许多放线菌的繁殖体，孢子(如链霉菌)和菌丝片段(如红球菌)比G(-)细菌细胞耐热。加热虽然能减少细菌同放线菌的比例，但也常减少放线菌的数目。 采用膜过滤法浓缩水中的细胞。然后将滤膜置于培养基的表面，放置乃个小时后移去，或一直留在上面，如处理放线菌繁殖体含量很低的海水,有人先将样品离心然后才过滤。 收集在腐烂的稻草和其它植物材料中的嗜热放线菌孢子可在空气搅动下进行，并可用简单的沉淀室收集孢子。然后，用取样器将空气撞击在培养基的平板上，这样可以减少分离平板中的细菌数目。 在分离前添加一些固体基质(如把几种基质加在土壤中)或洒些可溶性养分来强化培养基。 所谓诱饵技术是将固体基质加到待检的土壤或水中，待其菌落长成后再铺平板。有人曾广泛使用石腊棒技术来分离诺卡氏菌，从土壤中分离耐酸放线菌。近来，用花粉诱饵从土壤中分离出13株小瓶菌，其中有些新种或亚种。 3、所需菌种的分离 分离效率取决于培养基的养分、pH、加入的选择性抑制剂。 表2-3列举了分离放线菌的各种培养基配方。 广泛应用的三种培养基即几丁质琼脂、淀粉-酪素培养基和M3培养基。 因大多数放线菌都是嗜中性的，分离培养基的pH常在6.7-7.5之间。如要分离嗜酸放线菌，pH宜降低到4.5-5.0。 在分离培养基中广泛采用加入抗生素的方法，来增加放线菌的筛选。 注意：要使用抗真菌抗生素，不要使用抗细菌抗生素。 4、菌种的培养 放线菌：25-30℃。多数放线菌是好气的，因此必须保证足够的通气量；多数放线菌的最适生长温度为23-37℃，高温放线菌的生长温度范围在50-65℃。 嗜热菌：45-55 ℃。它能够产生耐热性蛋白质，在高温条件下，普通生物的蛋白质就会失活、变性，但是嗜热菌蛋白质不会变性，生命活动也不会终止。 嗜冷菌：4-10 ℃。嗜冷菌是指那些能在低于7℃时可以生长繁殖的细菌，例如假单胞菌黄杆菌、产碱杆菌和色杆菌属等。 5、菌落的选择 铺