[经济学]第五章 等电聚焦.pptVIP

第五章 等电聚焦 等电聚焦(isoelectrofocusing),缩写为IEF或EF，是60年代中期问世的一种利用有pH梯度的介质分离等电点不同的蛋白质的电泳技术。由于其分辨率高，因此特别适合于分离分子量相近而等电点不同的蛋白质组分。 30多年来发展很快，成为当前电泳中具有最高分辨率的技术。 一、 等电聚焦原理  等电聚焦是利用蛋白质分子或其他两性分子的等电点的不同，在一个稳定的、连续的、线性pH梯度中进行蛋白质的分离和分析。所以利用等点聚焦技术分析的对象只限于蛋白质和两性分子。分析的条件是凝胶中有稳定的、连续的和线性的pH梯度。 Native PAGE和IEF原理的区别 二、 等电聚焦技术 三、载体两性电解质和PH梯度的形成 利用凝胶内的缓冲液在电场作用下在凝胶内沿电场方向制造一个pH梯度。当蛋白质样品在这样的凝胶上电泳时，每种蛋白质都将迁移至与它的pI 相一致的pH处，具有不同pI的各种蛋白质最后都迁移至凝胶中相应的pH处，达到分离的目的。目前应用最多的是聚丙烯酰胺凝胶等电聚胶电泳。 3.1主要仪器试剂 3.2载体两性电解质 (1) Ampholine(瑞典LKB) 它是由许多脂肪族的多氨基多羧酸的异构体和同系物组成的, pH范围2.5-4.5，4-6.5，5-8，3.5-9.5. (2) Servalyte