分子生物学实验教程2012.doc

分子生物学实验 汕头大学生物系 目录 目录 2 ? 基因克隆、原核表达及其产物检测的实验流程 3 ? 分子生物学常用实验技术 4 一 TENS法提取微生物基因组DNA 4 二 DNA的琼脂糖凝胶电泳分析及其纯化、回收 6 三 利用PCR技术从植物基因组DNA扩增功能基因 10 四 碱法微量制备质粒DNA 14 五 质粒DNA/PCR产物的酶切反应 17 六 DNA的酶连、重组技术 20 七 CaCl2法制备E.coli感受态细胞 22 八 植物基因组DNA多态性的检测 24 九 重组DNA的转化及在原核细胞中的表达 26 十 蛋白质的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 29 十一 蛋白质的印迹转移（Western Blotting） 32 基因克隆、原核表达及其产物检测的实验流程 分子生物学常用实验技术 一 TENS法提取微生物基因组DNA 一． 学习掌握用TENS法微量提取微生物基因组DNA，该方法提取的DNA可用作PCR的模板和限制性酶切反应。 了解基因组DNA的其它提取方法 在表面活性剂SDS和高温的作用下，微生物细胞裂解，释放出细胞内含物，蛋白质在酚的作用下变性，在离心力的作用下，变性的蛋白在水相与有机相之间形成不溶的沉淀，从而除去细胞中的蛋白质。加入无水乙醇后，乙醇会夺去DNA周围的水分子，使DNA失水而易于聚合。高浓度的盐会水合大量的水分子，因此DNA