2016-2017学年高二生物苏教版选修1课件：41生物成分的分离与测定技术.pptx

第四章　生物化学与分子生物学技术实践第一节　生物成分的分离与测定技术一二三四五一二三四五一二三四五一二三四五一二三四五探究点一探究点二探究点三探究点一探究点二探究点三探究点一探究点二探究点三探究点一探究点二探究点三探究点一探究点二探究点三探究点一探究点二探究点三探究点一探究点二探究点三探究点一探究点二探究点三探究点一探究点二探究点三探究点一探究点二探究点三探究点一探究点二探究点三探究点一探究点二探究点三探究点一探究点二探究点三探究点一探究点二探究点三探究点一探究点二探究点三探究点一探究点二探究点三探究点一探究点二探究点三1 2 3 4 5 61 2 3 4 5 61 2 3 4 5 61 2 3 4 5 61 2 3 4 5 61 2 3 4 5 61 2 3 45 61 2 3 45 6情境导入课程目标早在古代,人类就已发现具有芳香气味的植株或花卉能使人神清气爽,将这些植物制成干品后,可当做药材和香料使用。但是,植物香料易挥发,不易储存。欧洲中世纪香料贸易的发展,促成了植物芳香油提取技术的诞生。植物芳香油是如何提取的呢?1.尝试蛋白质的分离。2.尝试从生物材料中提取某些特定成分。3.尝试测定生物材料中某些化学物质的含量。一、离心沉降法和薄膜透析法分离蛋白质1.在提取蛋白质时,可以采用研磨与超声波结合的方法将生物组织或细胞完全破碎,使蛋白质从细胞中释放出来,并使其溶解在适当的抽提液中。2.抽提液的选择需要根据蛋白质的特性而定,一般酸性蛋白质用偏碱性溶液抽提,碱性蛋白质用偏酸性溶液抽提,脂蛋白等则可用有机溶剂抽提。为了防止提取过程中蛋白质被蛋白酶分解,还可在抽提液中加入蛋白酶抑制剂。3.细胞破碎后,蛋白质溶解在抽提液中,通常用过滤或离心的方法除去其他物质。离心沉降法是通过控制离心速度,使分子大小、密度不同的蛋白质发生沉降分层,从而达到分离出不同种类蛋白质的目的。4.通过离心沉降法分离出来的蛋白质,往往要重新溶解,并脱去其中的盐分和有机溶剂,再根据蛋白质的不同特性,运用薄膜透析法等再次进行分离和纯化。5.薄膜透析法是利用蛋白质分子不能透过半透膜的特性,使蛋白质与其他小分子化合物(如无机盐、单糖、二糖以及氨基酸)分离的方法。二、凝胶色谱法分离蛋白质凝胶色谱法是根据蛋白质分子量的大小差异对其进行有效分离的方法。凝胶是由胶体溶液凝结而成的固体物质。凝胶颗粒在合适的溶剂中浸泡后充分膨胀,然后装入层析柱内,再加入欲分离的蛋白质混合物,以同一溶剂洗脱。在洗脱过程中,大分子蛋白质不能进入凝胶内部而沿凝胶颗粒间的空隙移动,洗脱路程较短,移动速度较快,因此最先流出柱外;小分子蛋白质可以进入凝胶颗粒内部的多孔网状结构,洗脱路程较长,移动速度缓慢,以致需要较长的时间才能流出柱外。这样使样品中分子量大小不同的蛋白质按顺序被先后分离出来。三、蒸馏蒸馏可将易挥发和不易挥发的物质分离开来,也可将液体混合物中沸点不同的物质分离开来。但液体混合物中各组分的沸点必须相差很大(一般至少相差30 ℃以上)才能得到较好的分离效果。当蒸馏沸点差别较大的液体混合物时,沸点较低的先蒸出,沸点较高的随后蒸出,不挥发的物质留在蒸馏器内,这样可达到分离和提纯的目的,所以蒸馏是分离和提纯液态混合物常用的方法之一。例如,用水蒸气蒸馏法提取植物芳香油等。但蒸馏沸点比较接近的液体混合物时,各种物质的蒸气几乎同时蒸出,所以难以达到分离和提纯的目的,此时就需要采用分馏。四、血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳1.操作流程配制试剂→准备器材→架滤纸桥→浸泡薄膜→细心点样→平悬薄膜→实施电泳→染色→漂洗→脱色2.结果分析血清蛋白包括清蛋白、α1球蛋白、α2球蛋白、β球蛋白和γ球蛋白等几种蛋白质,在pH为8.6的巴比妥缓冲液中带负电荷,在电场中向正极移动。由于蛋白质的分子量、空间结构和形状等不同,在电场中的移动速度不同,可以在醋酸纤维薄膜上分离形成清蛋白、α1球蛋白、α2球蛋白、β球蛋白和γ球蛋白五条区带。探究思考在血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳的过程中,为什么要盖上盖子?提示:为了使电泳槽内维持饱和蒸汽压,以免醋酸纤维薄膜在电泳过程中因电流通过发热而变干。五、提取芳香油在生产实践中,提取植物芳香油一般根据植物原料的特点确定具体的提取方法。例如,玫瑰油、薄荷油、肉桂油、薰