(分子生物学)第六章常用分子生物学技术-3.ppt

常用分子生物学技术 主要内容 第一节 分子杂交技术 第二节 目的基因制备技术 第三节 基因敲除技术 第四节 RNA干扰技术 分子杂交技术：利用单链核酸碱基互补配对，抗原与抗体、受体与配体、蛋白与其他分子的相互作用进行目的核酸、蛋白质检测，广泛应用于基因重组、生物印记示踪、生物芯片等领域，具有高特异性、高灵敏性、高通量等特点的技术。 高度特异性 易于标记和检测 探针的来源是否方便 制备探针的难易程度 Southern印迹是1975年由Southern创建的； 首先通过限制性核酸内切酶降解样品中DNA，再经凝胶电泳分离，将分离后的DNA片段从凝胶转移到硝酸纤维素薄膜等上并固定，再用标记过的探针进行杂交，以检测目的DNA。 与Southern印迹杂交比较： RNA提取过程中需特别注意RNA酶的污染 所用的器材最好与Southern印迹实验的分开使用 RNA变性的方法：不能用碱变性，因为碱会水解RNA 2’-OH 变性剂的作用：防止RNA分子形成发夹式的二级结构，以保持其单链线形状态 原位杂交技术除了具有核酸分子杂交的特异性高的特点之外，并可精确定位，因此该技术已广泛地应用于医学分子生物学的研究之中 其应用有以下几方面： 正常或异常染色体的基因定位 应用核酸探针与细胞内RNA进行杂交，检测基因表达水平 应用特异的病原体核酸作为探针对组织、细胞进行杂交，以检测有无该病原体的感染