[工学]核磁共振基本原理总复习.ppt

TOCSY COSY的交叉峰表明二个质子之间有J耦合，而TOCSY的交叉峰表明二个质子同属一个自旋系统 TOCSY是同相谱，可提供整个自旋体系的连接，而且信号强，对于谱峰证认很有用 核磁共振基本原理 总复习 吴季辉 NOESY 核磁共振基本原理 总复习 吴季辉 NOESY是通过NOE效应来建立核与核之间的联系的，NOESY的交叉峰表明二个质子之间有足够强的NOE效应，由交叉峰强度可得出核与核之间的距离 通常二个质子之间的距离不大于5?时才可能观测到NOE效应 NOESY谱及其变化（如异核编辑NOESY谱）是生物大分子结构测定最重要的核磁实验之一 NOESY的谱形, ? 表示正峰, ? 表示负峰 核磁共振基本原理 总复习 吴季辉 混合时间 ?m 不宜过长，否则将出现自旋扩散。一般来说，对于分子量在一万以下的蛋白质的NOESY实验，?m=150-200ms；而对于分子量超过一万的蛋白质的NOESY实验，?m150ms。若?m过长，有些峰的强度将下降。这就是由于纵向磁化经第二个核，进一步转移给第三个核，即自旋扩散所导致的。此时NOESY谱将出现一些新的峰，这些峰就是由于自旋扩散而产生的假峰。从这些假峰不能得到正确的距离信息 核与核之间的距离的测量通常以亚甲基CH2的两个质子的交叉峰强度作为参考。亚甲基CH2的两个质子的距离为1.75 ?，通过交叉峰强度的对比，就可得出任意质子间的距离 核磁共振基本原理 总复习 吴季辉 ROESY 核磁共振基本原理 总复习 吴季辉 ROESY谱特别适合于中等大小分子的质子间的距离的测定 不管分子量的大小，在旋转坐标系中二个质子间的交叉弛豫速率总是正的, 因而交叉峰与对角峰符号相反，通常对角峰调成正峰，而交叉峰为负峰 与NOESY谱比较， ROESY谱的干扰峰较多，因此除非是小肽，一般的蛋白质结构解析多用NOESY谱 结 束 核磁共振基本原理 总复习 吴季辉 * 避免饱和 * 目前对化学位移的计算还只能给出半定量的结果 * 在简单谱中谱线的位置与JAX的符号无关。在复杂的波谱中，则耦合常数的符号会很大程度地影响谱线的相对位置。 * * * * 组合脉冲去耦 组合脉冲：几个脉冲组合起来完成一个脉冲的作用，但具有更好的特性如在较宽的频率范围内起作用，对脉冲宽度的变化不太敏感，对频偏效应有一定的纠正，等等 MLEV-16: 一般用于二维同核TOCSY序列 WALTZ-16: 一般用于质子去耦 GARP: 具有最宽的去耦带宽。 一般用于对15N和13C核的去耦 核磁共振基本原理 总复习 吴季辉 核欧沃豪斯效应的建立，需要一个大体相当于自旋－晶格弛豫时间T1数量级的时间间隔，其消失也要时间 去耦则是即时的 核磁共振基本原理 总复习 吴季辉 去耦方式的小结 照射方式 脉冲前照射 采样时照射 NOE效应 耦合裂分 无照射 无 无 无 有 质子噪声去耦 有 有 有 无 门去耦 有 无 有 有 反门去耦 无 有 无 无 照射核与观察核 宽带去耦 选择去耦 不同，如13C｛1H｝ 可以 可以 相同，如1H｛1H｝ 不可以 可以 （脉冲同核去耦） 核磁共振基本原理 总复习 吴季辉 第七章仪器和实验方法 核磁共振基本原理 总复习 吴季辉 样品的准备 溶剂的选择 一个理想的溶剂必须满足以下的条件： 1. 样品在其中有高溶解度； 2. 在我们所感兴趣的波谱范围内没有溶剂峰； 3. 在做变温实验的温度范围内保持液体状态 通常使用一些氘代溶剂 减少溶剂峰的干扰 采用氘核内锁稳定磁场，起锁场的作用 氘代氯仿是一个很理想的溶剂，它既适合于1H，也适合于13C，在整个质子谱范围内透明，再加上化学性质惰性，便宜，所以是常用的溶剂 H2O 是生物分子最适宜的溶剂(90%H2O,10%D2O) 核磁共振基本原理 总复习 吴季辉 蛋白质NMR研究的溶液条件 选择的pH值尽量在偏酸性如pH 3~5，也可以稍为高一些，但尽量不要大于7。这是因为蛋白质中的酰胺质子NH在pH 3~5之间与水的交换最慢，在其他pH特别是7以上交换加快，导致NH的信号减弱甚至消失，而NH的信息对于蛋白质主链乃至侧链谱峰的认证都十分重要 缓冲体系的成份首先要保证蛋白质的稳定及高溶解度，蛋白质的浓度通常要求有数mM，小蛋白质最好有5 mM以上，大蛋白质起码也要有1 mM 。其次要考虑缓冲液中其他成份对蛋白质谱图的干扰，在这方面磷酸盐缓冲液最好，其他的如Tris或乙酸等有机