[工学]第四章 酶2.ppt

生 物 化 学 第四章 酶 酶促反应动力学 一、化学动力学基础 二、底物浓度对酶反应速率的影响 三、酶的抑制作用 四、温度对酶反应的影响 五、 pH对酶反应的影响 六、激活剂对酶反应的影响 一、化学动力学基础 1、反应分子数 1）单分子反应：仅有1种反应分子参加的反应 A→P，如同分异构，分子重排等 v=k . c，v反应速度，k反应速率常数， c反应物浓度 2）双分子反应：有2种反应分子参加的反应 A+B→P+Q v=k . c1 . c2 （c1 、 c2分别代表两种反应物浓度) 2、反应级数 1）一级反应：符合v=k . c的反应 多为单分子反应，对简单的反应来说一级反应与单分子反应是对应的，但对某些反应不一致 二、底物浓度对酶反应速率的影响 蔗糖酶水解，酶浓度不变，底物浓度[S]与反应速率关系 酶促反应的动力学方程1）米氏方程的推导 Michaelis Menten根据中间产物学说推导出表示酶促反应中底物浓度与反应速度关系的公式称~ （快速平衡法）。 整理，并令 米氏常数 米氏方程： Km称为米氏常数（ Michaelis constant）→当已知Km及vmax时，酶反应速度与底物浓度之间的关系 米氏方程的变化： ① Km ＞＞ [S] 时： v=v max[S]/ Km 初速度与[S]成正比的一级反应。 ②若[S]＞＞Km 时： v=v max 零级反应 ③ 若[S] = Km 时： v=1/2 v max 2）米氏常数的意义 米氏常数实际用途 若Km已知，则 1）可由所要求的v求[S]； 例：求反应速度达最大反应速度99%时的底物浓度 2）根据已知[S]求该反应v。 例：求[S]=3Km时的反应速度 Vmax和k3（kcat）的意义 一定酶浓度及一定条件下，酶对特定底物的Vmax也是一个常数，同种酶对不同底物的Vmax也不同，温度、pH和离子强度等也影响Vmax Kcat/Km的意义 生理条件下，大多数酶并不被底物所饱和（体内[S]/Km= 0.01-1.0），据米氏方程： Kcat/Km的意义 Kcat/Km：E与S反应生成产物ES的表观二级速率常数 3）测米氏常数的方法： 理论上，只要连续测定出对应底物的化学反应速度，并增加底物的浓度使反应到达最大速度→通过作图就可测定出Km 但事实上要得到vmax，需要很大的底物浓度，即使将底物浓度增加到很大，也只能趋近于vmax ，而导致Km不精确 ①Lineweaver-Burk双倒数作图法 通过实验测定Km和vmax的方法 a. 测定不同底物浓度[S]的反应速率 b. 以1/ v 对1/ [S]作图 c. 通过截距计算Km和vmax ②Eadie－Hofstee作图法 ④Eisenthal和Cornish－Bowden作图法 [S]标在横轴负半轴上，测得的v标在纵轴上，相应的[S]和v联成直线→该直线过两点（ －[S] ，0）（0，v） 三、抑制剂对酶反应的影响 某些物质，它们并不引起酶蛋白变性，但能使酶分子上的某些必需基团（主要是酶活性中心上的一些基团）发生变化→引起酶活力下降，甚至丧失→酶抑制剂（inhibitor） 可逆抑制的三种类型 竞争性抑制：抑制剂与底物相似，可以竞争性地与酶的活性中心结合，增加底物的浓度可以解除抑制 非竞争性抑制：抑制剂与底物不相似，抑制剂是与酶的活性中心外结合位点结合，可形成酶 - 抑制剂 - 底物三元复合物 反竞争性抑制：酶与底物先结合，然后再与抑制剂结合 酶的可逆抑制竞争性抑制 抑制剂（I）与底物（S）非常相似 I与S竞争酶的活性中心 增加S的浓度可解除抑制→不影响vmax，但酶的亲和力减小（Km增大） 酶的可逆抑制竞争性抑制 酶的可逆抑制竞争性抑制 酶的可逆抑制非竞争性抑制 酶E与底物S结合后（ES），可再与抑制剂I结合（ESI） 酶E与抑制剂I结合后（EI），可再与底物S结合（ESI） 但ESI不能解离产生P和E →表观Km不变，vmax减小 酶的可逆抑制非竞争性抑制 酶的可逆抑制反竞争性抑制 酶蛋白E必须先与底物S结合（ES），然后才能与抑制剂（I）结合（ESI） 由于ESI不能解离产生P和E →表观Km减小，vmax也减小 酶的可逆抑制反竞争性抑制 三种可逆抑制的区别 酶的不可逆抑制剂 酶的不可逆抑制剂 专一性不可逆抑制：分为KS型和Kcat型两大类 KS型不可逆抑制：具有底物类似的结构，可以和相应的酶结合，还带有一个活泼的化学基团，能与酶分子中的必需基团反应进行化