色谱分离-1.pptVIP

1 色谱分离 一、色谱分离技术的定义及起源 色谱分离技术又称层析分离技术或色层分离技术，是一种分离复杂混合物中各个组分的有效方法。它是利用不同物质在由固定相和流动相构成的体系中具有不同的分配系数，当两相作相对运动时，这些物质随流动相一起运动，并在两相间进行反复多次的分配，从而使各物质达到分离。 在茨维特的实中： 装有CaCO3的玻璃管 ——色谱柱 CaCO3 ——固定相 纯石油醚 —— 流动相 在该实验中，碳酸钙上混合色素被分成不同色带的现象，像一束光线通过棱镜时被分成不同色带的光谱现象一样，因此茨维特把这种现象称为色谱，相应的分离方法称为色谱法（色层法，层析法） 色谱分离图示 色谱的发历程 二、色谱分离的机理 色谱法是一组相关分离方法的总称，它的机理是多种多样的 共同点：必须包括两个相。 一相是固定相，可为固体和液态，通常为表面积很大的或多孔性固体； 另一相则流过此固定相，称为流动相，是液体或气体。 当流动相流过固定相时，由于物质在两相间的分配情况不同，经过多次差别分配而达到分离，或者说，易分配于固定相中的物质移动速度慢，易分配于流动相中的物质移动速度快，因而逐步分离。 色谱法实质是分离 色谱分离的基本条件： 1.互不相溶的两相（流动相、固定相）； 2.被分离组分在两相之间作相对运动 色谱法实质—分离 分离依据： 各组分在两相之间作用力不同　(吸附能力　分配系数　离子交换能力大小、排阻能力　其他亲合作用) 各组分差速异行→分离 层析谱的本质是使一种液体均匀地渗过一个相当细碎的物质的柱体，这些物质通过某种过程有选择地阻留了液体内的某些组分。 ——马丁（A. J. P. Martin）（英） 三、色谱分离具有的基本特点 （1）分离效率高 色谱分离的效率是所有分离纯化技术中最高的。 （2）应用范围广 从极性到非极性、离子型到非离子型、小分子到大分子、无机到有机及生物活性物质，以及热稳定到热不稳定的化合物，都可用色谱方法分离。 （3）选择性强 在色谱分离中，可通过多种途径选择不同的操作参数，以适应各种不同样品的分离要求： 可选择不同的色谱分离方法，如吸附色谱、分配色谱、离子交换色谱、凝胶色谱、亲和色谱等； 可选择不同的固定相和流动相状态，固定相可用液、固两大类，流动相可用气体、液体或超临界流体； 可选择各种不同性状的物质作固定相或流动相； 可选择不同的洗脱方法，如前沿分析、置换展开、洗脱展开等； 可选择不同的操作条件，如温度、pH、离子强度和流动相速率等。 （4）高灵敏度的在线检测 在分离和纯化过程中，可根据不同的物理与化学的原理，采用不同的高灵敏度检测器进行连续的在线检测，以保证在要求的纯度下得到最高的产率。 （5）分离速度快 高分离效率前提下的高分离速率，可以提高单位时间的产量。 （6）过程自动化操作 高度的自动化操作保证了产品的质量，提高了产率，节省了大量的劳动力，降低了生产成本。 四、 色谱分类 1) 按应用的目的 A、制备性色谱(preparation Chromatography)：工业规模，实验室规模 B、分析性色谱(analytical Chromatography)：GC、LC、HPLC、TLC等。 ? 2) 按流动相 A、GC: 气-固色谱法(固定相为固体) 气-液色谱法(将不挥发的液体固定在适当的固体载体上作为固定相) B 、LC 液-固色谱(固定相为固体) 液-液色谱(液体固定相固定在适当的固体上) ? 4）按处理量分 A.分析色谱（10mg） B.半制备色谱(10-50mg) C.制备色谱(0.1-1g) D.工业生产规模色谱(20g/d) 纸层析 是一种常用的快速分离、鉴定方法，可用于定性分析以及确定分离方案，但一般不用于定量分析 介质：滤纸 操作方法：将试样溶于适当溶剂中，点样于滤纸的一端；选用适当的展开剂，借助毛细管现象从点样的一端向另一端流动，展开结束后，取下滤纸，晾干，染色显迹。 展开剂的选择 展开剂可以是单一溶剂，也可以是混合溶剂。 常用的氨基酸纸层析体系中使用的展开剂为：正丁醇-甲酸-水（15：3：2） 展开方式：3种 上行色谱 下行色谱 径向色谱 薄层色谱法 将固定相涂布在惰性固体上，形成薄层进行色谱分