第五章-动植物细胞培养动力学.pptVIP

2007年，全球销售额最高的6大类生物技术药物，分别是肿瘤治疗药物、anti-TNF alfa药物、EPO、胰岛素、beta-干扰素和凝血因子。这6大类中有5类都是经哺乳动物细胞表达生产的，只有beta-干扰素是大肠杆菌和酵母表达的。所以，应看到动物细胞大规模培养是当前生物药物生产的主流方式。 Vero细胞建株于1962年3月27日，是由日本千叶大学的Y. Yasumura和Y. Kawakita从一只正常的雌性成年非洲绿猴(Cercopithecus aethiops)的肾中分离得到。1964年6月15日，已传至93代的该细胞系被送往美国国立卫生研究院(NIH)下属过敏与传染性疾病国家研究院(National Institute of Allergy and Infectious Diseases ，NIAID)的热带病毒研究所。随后提交给ATCC，代次为113代，再经放大建库被繁殖到121代。到了厂家，又需建立主库和工作细胞库，再经培养，所以大部分的疫苗制备都是在130或140代上进行的。 CHO细胞即中国仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ovary)，于1957年建株。在各种哺乳动物细胞表达系统中，CHO细胞是生产蛋白药物的首选宿主细胞，其应用较多的表达系统有CHO-dhfr?、CHO-NEOSPLA和CHO-GS三种，其中CHO-NEOSPLA最适于表达单克隆抗体，也可与CHO-dhfr?或CHO-GS一样，用来表达重组蛋白。 动物细胞与微生物细胞的培养方法比较 细胞产物的工厂化生产 悬浮培养生物反应器 机械搅拌式反应器 优点:是能够获得较高的溶氧系数。 缺点:剪切力大。 植物组织培养的概念 植物细胞大规模培养的技术要求 从工程的角度讲必须要进一步研究和开发适宜于植物生长和生产的生物反应器，建立最佳的控制和调节系统。 从培养技术方面讲必须满足以下三个条件： 培养的细胞在遗传上应是稳定的，以得到产量恒定的产物。 细胞生长速度快，短时间内能生产较多产物 产物不被迅速降解，最好能分泌到培养基中 植物细胞规模化培养体系的建立 种子细胞选择 外植体 高产细胞 种子细胞增殖与放大培养 大规模培养体系建立 动物细胞培养的过程： 图（生化生产工艺学P221） 蔗糖为碳源时，植物细胞首先分解蔗糖为葡萄糖和果糖，而后优先利用葡萄糖。 分别以果糖或葡萄糖为碳源分批培养烟草细胞时,前者有： 后者为： 由于动植物细胞的培养过程是好氧过程，因此，许多科技工作者研究了与细胞呼吸速率相关的因素。 例如，人参细胞培养中，添加椰子汁后细胞的生长速率加快，耗氧量较不添加椰子汁时明显增大。 另外，也有报道，Acer．Psedoplatanus Ｌ 细胞培养中，细胞体内的含氮量与耗氧量有正比例关系。 二、 呼吸与生长模型 加藤等所获得的烟草细胞分批培养的结果表明：当氧为细胞生长的限制性因素时， 与Qo2有与上式相似的关系。说明植物细胞培养中氧的消耗，部分用于维持代谢，部分用于生长繁殖，所获得的 一般好氧微生物的比生长速率μ与菌体的维持常数m及氧的比消耗速率Qo2有如下关系： 这可能是植物细胞培养过程中的重要特性。 与一般微生物的m 和Y值相比，m 很小而Y较大。 5.2.2 植物细胞的培养 一、植物细胞的培养操作 培养方式： 根据所处状态的不同，分为悬浮培养与固定化植物细胞培养法， 根据操作方式的不同，又分为分批式、反复分批式和连续式培养3种。 植物细胞的分批培养与微生物的分批培养类同。由于操作简单，从实验室到大型罐广泛应用。 分批培养中，植物细胞的生长曲线一般呈S型，可明显观察出诱导期、对数生长期、减速期、静止期和衰亡期。但是与细菌和酵母菌的培养相比，即使是生长速率快的烟草细胞，分批培养时间（一个周期）也要6天以上，生长缓慢。 1、分批培养 悬浮培养（cell suspension culture） 悬浮培养是细胞培养的基本方法，是将单个游离细胞或小细胞团在液体培养基进行培养增殖的技术。 1、愈伤组织诱导 要求：松散性好，增殖快，再生能力强。其外观一般是鲜艳的乳白或淡黄色，呈细小颗粒状，松散易碎。 适于悬浮培养 适于再生植株 若反应器内培养液体积为V，补加量为F′（等于取出量），则比值F′/ V称为替换率D′。D′与连续培养中的稀释率D不同，其与培养液取出至加入完成期间的比生长速率μ′有如下关系： 在上式中，Xt和X0分别为时间t=t和t=0时的细胞浓度。硅地的实验结果表明，反复