第四章-灭菌技术-第2次课(前45分钟)-改后.pptVIP

二、生产上培养基的灭菌方法 1.概念： 将配制好的培养基放在发酵罐或其他容器中，通入蒸汽将培养基和所用设备一起灭菌的操作过程。 2.分批灭菌的一般操作过程 （1）培养基预热 培养基先加热到80～90℃，然后再导入蒸汽升温到120～180℃。 ①预热的目的？ ②预热的方法？ （2）培养基灭菌 方法： 将蒸汽从进气口、排料口、取样口直接导入罐内，所谓的“三路进气”。使罐温上升到120～130℃，罐压维持在1×l05Pa(表压)左右，并保温30min。 3.分批灭菌的注意事项 （1）各路进口要蒸汽畅通，防止短路逆流，罐内液体翻动要剧烈，以使罐内物料达到均一的灭菌温度。 （2）排气量不宜过大，以节约蒸汽用量。 （3）灭菌将要结束时，应立即引入无菌空气以保持罐压，然后开夹套或蛇管冷却水冷却。 （4）在引入无菌空气前，罐内压力必须低于空气过滤器压力。 （5）要考虑物料体积对升温过程的影响。 （6）空罐的准备 ① 发酵罐空罐严密度的检查 往往被忽略，但教训深刻。 ② 罐内、罐外设备的检查 搅拌传动系统、罐内管路、冷却设备蛇管和夹层 罐外各管路、支管路、阀门的严密度及畅通情况 取样阀门被菌丝焦化物堵塞倒罐的教训。 ③ 死角的清除 死角指的是在灭菌过程中蒸汽的高温所达不到、消不透的角落。 ④ 空罐的预消 有些厂家。 （7）原材料中颗粒及杂物的干扰 （8）搅拌在实罐灭菌中的作用 （9）加热和保温 间接加热升温 直接进汽 （10）假压力的形成与防止 （11）泡沫的产生与消除 （二）连续灭菌 1.概念： 将配制好的培养基在通入发酵罐时进行加热、保温、降温的灭菌过程，也称之为连消。 2.连续灭菌流程 (1)配料 （2）预热 预热的目的 可不预热 （3）加热 direct heat exchanger (steam injector) 加热的主要作用？温度l26～132℃；停留时间20～30s 不同的加热器 （4）保温 杀灭微生物的主要过程 A.维持罐 B.管式维持器 避免返混，减少培养基成分破坏 The following temperature time regimes were calculated to give the same Del factor of 45.7 喷淋冷却器 （5）降温 A.喷淋冷却器 B.螺旋板换热器 C.板式换热器 D.真空冷却器 indirect heat exchanger（Double Spiral heat exchangers） 板式换热器 连消塔式连续灭菌流程 板式换热式连续灭菌流程 基于螺旋式换热器典型连续灭菌流程 3.空罐灭菌 空罐灭菌也称空消。无论是种子罐、发酵罐、还是尿素（或液氨）罐、消泡罐，当培养基（或物料）尚未进罐前对罐进行预先灭菌。 灭菌后为避免罐压急速下降造成负压，要等到经过连续灭菌的无菌培养基输入罐内后，才可以开冷却水冷却。 为了杀死所有微生物特别是耐热的的芽孢，空罐灭菌要求温度较高，灭菌时间较长，只有这样才能杀死设备中各死角残存的杂菌或芽孢。 4.发酵附属设备及管路的灭菌 发酵附属设备有总空气过滤器、管道、计量罐、补料罐等。 物料总管路的准备与灭菌 管道灭菌的蒸汽压力不应低于3.4×l05Pa(表压)，灭菌时间为1h。新安装的管道或长期未使用的管道灭菌时间可延长到1.5h，灭菌后以无菌空气保压，自然冷却。 培养基灭菌时间的计算 例1：有一发酵罐内装40m3培养基，在121℃温度下进行实罐灭菌。原污染程度为每1ml有1×107个耐热细菌芽孢，求理论灭菌时间。 若考虑升温对灭菌的贡献 1.保温开始时培养基中活菌数不是N0而是Np 例2：根据例1中的条件，并且已知升温阶段培养基温度从100℃升到 121℃需要20min,考虑这一阶段的灭菌作用，求保温时间？ （例1条件：40m3培养基，121℃实罐灭菌。每1ml有1×107个耐热细菌芽孢）。 例3：若将例1中的培养基采用连续灭菌，灭菌温度为131 ℃, 此温度下灭菌速率常数为0.25s-1，求灭菌所需的维持时间。 分批灭菌和连续灭菌的比较 连续灭菌的优点： 高温瞬时，培养基受热时间短，营养成分破坏少，有利于提高发酵产率； 发酵罐利用率高； 采用板式换热器时，可节约大量能量； 适宜采用自动控制，劳动强度小 连续灭菌不适宜的情况 培养基中含有颗粒或较多泡沫 容积较小的发酵罐 其他灭菌方法 1.巴氏消毒法（pasteurization