生物化学DNABiosynthesis生物合成102-4.pptx

第十一章 DNA Biosynthesis;要求;与大肠杆菌 DNA复制相关的基因;DNA生物合成的两种方式： DNA复制和反转录 DNA体内复制： 原核、真核生物的染色体 细菌质粒（环状，双链） 真核细胞器DNA（线粒体、叶绿体） 病毒（双链，环状） DNA的体外复制：DNA分子克隆; 1958年，F.Crick提出的中心法则揭示了遗传信息传递的方向。 A. 以DNA为模板合成DNA B. 以DNA为模板合成RNA C. 以mRNA为模板合成蛋白质; 中心法则 ; 中心法则;第一节 DNA的复制 ; 1963年，Cairns用放射自显影方法在显微镜下观察到完整的正在复制的E.coli. DNA。 3H-脱氧胸苷标记E.coli. DNA，经过一代半时用溶菌酶消化细胞壁，将DNA转至膜上，压上感光胶片，3H放出的β粒子还原银，感光后的胶片在光学显微镜下观察。 ; Semi-conservative replication;2. 复制起点、复制单位和方向 ⑴复制起点 多数生物的复制起点富含AT。 ⑵复制单位 复制子(Replicon)：基因组中能独立进行复制的单位，每个复制子含有一个复制起点。; 环状双链DNA只有一个复制起点，它们是一个复制子。 真核染色体DNA有多个复制子。 在一个完整的细胞周期中，每一个复制起点只使用一次。;⑶复制方向和速度 定点起始，复制方向大多数是双向的，形成两个复制叉，少数是单向复制，形成一个复制叉。 速度：单向，双向等速，双向异速; 复制的方向;3. 复制方式 ⑴直线双向 单点双向（T7），多点双向（真核染色体）。 ⑵θ型 单向，双向（E .coli.） ⑶滚环 单链，环状，Φx174 ⑷D环 线粒体，叶绿体 ⑸多复制叉（E .coli.）; 复制方式-1; 复制方式-2; 复制方式-3;4. 半不连续复制 所有DNA聚合酶催化反应的方向是5’→3’ 1968年，发现冈崎片段。 细菌长: 1000-2000 bp 真 核: 100-200 bp，约等于一个核小体DNA 的长度 ; 复制叉; DNA replication;二、DNA合成反应; 2. 反应过程; 反应特点: ⑴ 4种dNTP底物 ⑵ 反应受模板指导 ⑶ 引物3’有羟基 ⑷ 链延长方向5’ → 3’ ⑸ 产物的性质与模板相同;三、参与DNA复制的酶和蛋白质 1. 原核DNA聚合酶（E.coli.） ⑴ E.coli. DNA pol. I（单体酶） 催化活性：5’ → 3’ 聚合 3’ → 5’ 外切 5’ → 3’ 外切;⑵ E.coli. DNA Pol.Ⅱ（寡聚酶） 催化活性: 5’ → 3’聚合，3’ → 5’外切 ⑶ E.coli. DNA pol. Ⅲ （寡聚酶） 催化活性同DNA Pol.Ⅱ，10种亚基组成， 是DNA合成主要的酶，又称复制酶。 ; E.coli. DNA pol.Ⅲ;⑷ DNA聚合酶Ⅳ和Ⅴ 1999年发现，参与DNA的错误倾向修复。 当DNA受到严重损伤时，可诱导合成这2种 酶，它们使修复缺乏准确性。; 2. 真核DNA聚合酶 （1）DNA聚合酶α 合成引物 （2）DNA聚合酶β 修复DNA损伤 （3）DNA聚合酶γ 线粒体DNA的复制 （4）DNA聚合酶δ 核DNA的复制; 3. 引物合成酶 DNA复制需要RNA引物，引物合成酶可合成10-60个碱基的RNA。 4. 解螺旋酶