第九章 凝胶过滤及离子交换层析介质.ppt.ppt

4、选择适宜工作条件，提高工作容量 离子交换剂是一种聚电解质，功能基的种类决定其电性能，功能基的多少决定其交换能力。 全交换容量：指每克干介质或每毫升湿介质具有的功能基的含量。 工作容量：或称有效容量是指每克干介质或每毫升湿介质在一定操作条件下交换吸附蛋白质的实际含量。 * 四、离子交换分离介质使用中应注意的问题 1、预处理 2、装柱 3、流速 4、适当的洗脱和再生方式 5、消毒及树脂的“复苏” * 第五节 离子交换介质的种类 一、通用型离子交换树脂功能基种类 * * 二、通用型树脂常用牌号 * * * 三、生化专用离子交换介质 * * * * * * * * * * * * 复习题 1、凝胶过滤介质的种类及凝胶过滤的优缺点。 2、什么是离子交换法，生化用离子交换剂的特点是什么？ * 2、Sepharose Sepharose系是目前生化分离专用介质中型号最多，应用最广的最大系列产品。其合成工艺不断改进，换代产品不断出现，性能日益完善。 * * （1）Sepharose 是该系中最早的产品，为非交联结构，因此不能进行高压灭菌，仅能在2-40度范围内使用。 （2）Sepharose CL 是琼脂糖珠体与2，3-二溴丙醇反应后具有共价交联键的产物。 （3）Superose 由珠状琼脂糖经过两次交联而制备的新型凝胶。用含双环氧基及多环氧基的混合长交联剂对琼脂糖珠体进行第一阶段交联，然后再与含双环氧基的短链交联剂进行第二次交联，得到的产品为Superose。 （4）Sepharose Fast Flow 此类产品是新型的BioProcess凝胶介质，是经过高度交联的琼脂糖珠体，大大加强了其机械强度，以流速快为其特征。 * 三、聚丙烯酰胺系 Bio-Gel P是丙烯酰胺与N,N’-亚甲基双丙烯酰胺共聚而成的亲水性凝胶，其中含有极少的游离电荷，干胶的羧基含量≤3.0mmol/g，因此非特异吸附性很小，这类合成高聚物结构稳定，不受微生物侵蚀，可在120度消毒30min后，色谱性能不变。改变交联剂的用量可控制凝胶孔径的大小，得到不同排阻极限的系列产品。 * * 四、Sephacryl 系列 是一类经济高效的凝胶过滤介质，它是由烯丙基葡聚糖与N,N’亚甲基双丙烯酰胺经共聚而成的一种共价交联的刚性珠体。 * * * 五、Superdex 系列产品 Superdex是最新的凝胶过滤介质。其结构是将葡聚糖以共价键方式结合到高交联的多孔琼脂糖珠体上形成的复合凝胶。它具有葡聚糖及琼脂糖均匀组分的骨架结构，因此其将交联葡聚糖优良的过滤选择性及高交联的琼脂糖的物理化学稳定性集于一身，成为具有优良选择性和高分辨率的产品。 * * * 六、聚乙烯醇系 聚乙烯醇系是以交联聚乙烯醇为骨架的凝胶过滤介质，为多孔的三维网状结构，大分子链上含有丰富的羟基，它不但使骨架为高亲水性，还可利用羟基进行化学改性而得到含有多种功能基的离子交换剂及亲和吸附剂。该系列凝胶与生物大分子有较好的相容性。 * * 七、Bio-Beads S-X 系 Bio-Beads S-X 系列是美国Bio-Rad公司的产品，为多孔苯乙烯-二乙烯共聚物，其适用于疏水性物质及非水体系。以二乙烯苯的含量控制孔径，但孔径也受溶剂的影响，在芳香族溶剂中，由于珠体有溶胀作用，其孔径较大，排阻极限增大；若在醇类溶剂中骨架不溶胀，孔径较小，排阻极限亦小。 * * 第四节 离子交换法及离子交换剂的选择 一、离子交换法 离子交换法是通过带电的溶质分子与离子交换剂中可交换的离子进行交换而达到分离纯化的方法。 该法主要依赖电荷间的相互作用，利用带电分子中电荷的微小差别而进行分离。 由于离子交换法分辨率高、工作容量大且易于操作，它已成为蛋白质、多肽、核酸及大部分发酵产物分离纯化的一种重要方法，在生化分离中约有75%的工艺采用离子交换法。 * 离子交换剂是一类能显示离子交换功能的高分子材料。功能基由骨架上的带电基团与可进行交换的能移动离子两部分组成，二者所带电荷相反，以静电力结合，可进行交换的离子称为反离子或抗衡离子，这种反离子可与溶液中带同种电荷的离子进行交换反应。 因此，离子交换反应是可逆的，在一定条件下被交换的离子可以“解吸”使离子交换剂又恢复到原来的离子形式。 * 分离 1、选择适当条件使一些溶质分子变成离子态，通过静电作用结合到离子交换剂上，而另一些物质不能被交换，则这两种物质被分离。 2、带同种电荷的不同离子虽都可以结合到同一介质上，但由于各带电量不同，与介质的结合牢度不同，改变洗脱条件可依次被洗脱而达到分离的目的。 * 生物大分子的分离纯化 可采用两种方式： 一种方式是将目的产物离子化，被交换到介质上，杂质不被吸附而从柱流出，称为“正吸附”。 另一种方式是将杂质离子化后被交换