[高等教育]基因组学 课件 73基因表达的转录后调控.pptVIP

基因表达的转录后调控 真核生物前体mRNA剪接 高等植物内含子的结构特性 变位剪接 RNA编辑 真核生物前体mRNA剪接 pre-mRNA， hn RNA 剪接反应 剪接体的组成与循环 剪接体中心的动态RNA骨架 初始转录产物pre-mRNA，不均一核RNA(heterogeneous nucIear RNA，hn RNA) 基因长度存在差异：RNA大小十分不均一，平均相对分子质量为2×107，比细胞质中成熟mRNA的平均相对分子质量1.5×106大十倍 RNA合成至大约30个核苷酸时，5’末端加入甲基化鸟苷的“帽子”；转录终止时，3’末端加入100－200个腺苷酸，成为poly(A)尾 经剪接去除内含子，成熟mRNA经核孔进人细胞质 mRNA稳定性的调控 原核生物mRNA的半衰期平均3min。高等真核生物迅速生长的细胞中mRNA的半衰期平均3h。高度分化的终端细胞中许多mRNA极其稳定，有的寿命长达数天。 mRNA的3’端尾巴通过影响mRNA寿命来影响翻译效率。 剪接反应：去除基因序列中的内含子，连接外显子，成为有功能的成熟mRNA的过程。 剪接与三个特征序列相关联：5’剪接位点序列GU，3’剪接位点序列AG和分支点序列A 两次连续的转酯基反应 trans-esterification reactions 两次连续的转酯基反应trans-esterification reactions 第一步：分支点腺苷酸2’-OH亲核攻击5’剪接位点的磷酸基，此处裂解，产生套索中间物和5’外显子，套索通过2’-5’磷酸二酯键把内含子的5’末端与分支点的腺苷酸相连接 第二步：第一步释放的游离5’外显子的3’-OH ，亲核攻击3’剪接位点的磷酸基，从而释放套索内含子，并把外显子连结起来 剪接体的组成与循环 剪接体splicesome：剪接由RNA介导、各种蛋白质参与。参与剪接的RNA和蛋白质共同构成一个庞大的颗粒复合体。 50－60 S的核糖核蛋白颗粒 主要组成单位：富含鸟苷酸的核内小核糖核蛋白U sn RNPs，由核内小分子RNA-sn RNA和一些蛋白质组成 剪接体在剪接过程中逐步组装起来，涉及到RNA－RNA、蛋白质－RNA、蛋白质－蛋白质相互作用 核心：各种RNA－RNA相互作用形成动态骨架 蛋白质促进RNA的重排使其保持稳定或失去稳定 催化正确的识别、内含子切割和之后的外显子连接 参与剪接的sn RNP：U1、U2、U5和U4/U6，根据所含的sn RNA来命名。 U1、U2和U5 sn RNP都包含一个sn RNA和几个(＜20)蛋白质； U4/U6 sn RNP则包含U4、U6 sn RNA和几个蛋白质 初级剪接体：U1 sn RNP中的sn RNA与5’剪切位点序列互补结合、U2 sn RNP中的sn RNA与分支点序列互补结合 U4/U6和U5 sn RNP以三聚体形式进入剪接体组装过程，与已形成的初级剪接体通过蛋白质－蛋白质相互作用，形成剪接体（60S的核糖核蛋白复合物）。 配对的sn RNA和前体mRNA之间出现重排，形成活性剪接体 前体mRNA上各种U sn RNP的组装是一个有序的途径，并且需要其他非U sn RNP蛋白的暂时结合，这种剪接体组装和解体的途径称为剪接体循环 剪接体中心的动态RNA骨架 高等植物内含子的结构特性 异质内含子的加工 剪接体核心序列在不同系统中是相似的 具有哺乳动物内含子，或植物与哺乳动物内含子杂合体的前体mRNA，在植物细胞中表达时，一般不被剪接或被不正确地剪接 一些植物内含子在转染的哺乳动物细胞或HeLa细胞的离体剪接提取物中，不被加工或者低效、不正确剪接 内含子加工的单子叶、双子叶植物差别 单子叶来源的内含子，在双子叶植物细胞中表达时，不被加工或者低效加工。 双子叶来源的内含子，在单子叶细胞中表达时，呈现正确、有效地加工 哺乳动物来源的内含子能在单子叶植物中加工，但完全不能在双子叶植物 内含子加工的种间差别 不同的双子叶植物种也呈现出加工活性的差异 玉米转座子En / Spm在不同双子叶植物种表达En-1编码的两个基因，tnpA和tnpD可通过选择性剪接产生。 在天然寄主玉米中表达时tnpA转录物与和tnpD转录物的比例为100 : 1; 在双子叶植物拟南芥中此比例与在玉米中相同; 在马铃薯中表达时， tnpD转录物反而占优势。 高等植物内含子的结构特点 内含子的大小：比大多数哺乳动物内含子短得多，高等植物前体mRNA内含子在长度上差异较大，约2/3150nt，大部分处在80-139nt的长度范围； 内含子5’剪接位点：双核苷酸GU在所有天然的植物内含子中均是保守的，个别情况GU可以由GC代替。 双子叶和单子叶植物有1％的GC频率