[生物学]放射性免疫药盒本科课程_2011.pptVIP

* 第七章 放射免疫分析试剂盒的制备 一、概要 二、放射免疫分析试剂盒主要组分的制备技术 三、典型放射免疫分析试剂盒的制备 四、免疫分析技术进展 放射性同位素在医学上的应用 γ相机 1 体内诊断（核医学影像学) SPECT PET 2 治疗（放射治疗药物、种子源） 3 体外检测（放射免疫分析） 一、 概要 概要 概念与原理 主要的放射标记免疫分析方法 放射标记免疫分析方法的特点 ◆放射免疫分析技术（RIA）是基于免疫分析的特异性与放射性测量的高灵敏性而建立的一种超微量分析方法，能够定量检测生物体内成百上千种活性物质，是现代生物、医学和临床诊断的重要手段。 1 概念与原理 以放射性核素（主要为125I, 57Co, 3H, 14C等）标记抗原，抗体，配基或受体，在体外条件下，经过不同的结合反应（竞争或非竞争性的），再将结合和未结合的标记物分开，测量其放射性活度，从而计算各种生物活性物质的含量。 ◆基本原理 抗原(Antigen)：能刺激动物机体的免疫活性细胞产生抗体或致敏淋巴细胞，并在体内外与其发生特异性反应（结合）的物质。一般为异种或异体物质（即机体的免疫活性细胞从未接触过的异物）。 完全抗原：具有上述两种特性，即单独能刺激动物机体产生抗体或致敏淋巴细胞，又能与这些产物在体内外发生特异性结合生成抗原-抗体复合物。大多为大分子量的蛋白质。 半抗原(Half Antigen, Hapten)：单独不能刺激动物机体产生抗体或致敏淋巴细胞，但能与相应的抗体或致敏淋巴细胞起特异性结合反应生成抗原-抗体复合物的物质。与载体结合后注入动物体内能诱导抗体形成，即成为完全抗原。 抗体(Antibody)：由抗原诱导形成的一种血清球蛋白，与抗原结合形成抗原-抗体复合物。 特异性(Specificity)：抗体抗原反应具有特异性，即一种抗体（抗原）只能与相应的抗原（抗体）结合，不能与其它无关的抗原（抗体）结合。 哺乳动物 IgG IgA IgM 人体 IgG IgA IgM IgD IgE 主要的放射免疫分析方法 放射免疫分析（Radioimmunoassay, RIA） 免疫放射量度分析（Immunoradiometric assay, IRMA） 受体放射性配体结合分析（Receptor Radio-ligand Bonding Assay, PRLBA） 放射受体分析（Radio-Receptor Assay, RRA） 2 主要的放射标记免疫分析方法 1958-1960年由Yalow RS and Breson SA创建，为最早的放射标记免疫分析方法。（1977年获得了诺贝尔生物医学奖）。 原理：用放射性核素标记抗原，标记抗原与非标记抗原同时竞争结合物（如抗体）上有限的结合位点。然后将结合与未结合的游离抗原分离，测定其放射性分布，利用标准曲线确定样本中待测物的含量。 1) 放射免疫分析（Radioimmunoassay, RIA） Ag* +Ag+ Ab Ag*-Ab + Ag-Ab 游离物（F） 复合物（B） 对于RIA，应满足以下条件： ◆ 抗原是纯一的，只由一种化学成分组成； ◆ 抗体也仅由一种化学成分组成； ◆ 抗原与抗体均为单价，即一分子抗原只能和一分子抗体反应； ◆ 标记的和未标记的抗原具有相同的物理-化学性质； ◆ 抗原-抗体反应遵循质量作用定律； ◆ 反应达到平衡； ◆ 结合抗原和未结合的游离抗原能完全分开，且不破坏反应平衡； ◆ 能准确测量结合抗原和游离抗原之比，或结合抗原与总抗原之比。 K1 Ag + Ab AgAb k-1 K（亲和常数）= =(AgAb）/ [ Ag] [ Ab] k-1 b/f =（AgAb）/ ( Ag)=K(Ab) b/f=K(AbT-B) K1 放射免疫分析的Scatchard图 2) 免疫放射量度分析（Immunoradiometric assay, IRMA）