基因表达调控生物化学与分子生物学.ppt

螺旋-回折-螺旋 （helix-turn-helix，HTH） 同源异型域 （homeodomain，HD） 识别螺旋 DNA大沟 DNA小沟 螺旋1N－端 DNA大沟 螺旋3 碱性螺旋-环-螺旋结构也可调节DNA结合及蛋白质二聚体化 碱性螺旋-环-螺旋 （basic helix-loop-helix，bHLH） bHLH双体 DNA大沟 螺旋 螺旋 环 （三）mRNA 转录激活及其调节 polⅡ TFⅡH TAF TFⅡF TAF TAF TFⅡA TFⅡB TBP 真核RNA聚合酶Ⅱ在转录因子帮助下，形成的转录起始复合物 TATA DNA EBP 真核基因转录调节是复杂的、多样的 *不同的DNA元件组合可产生多种类型的转录调节方式； *多种转录因子又可结合相同或不同的DNA元件。 *转录因子与DNA元件结合后，对转录激活过程所产生的效果各异，有正性调节或负性调节之分。 四、转录后水平的调节 hnRNA加工成熟的调节 mRNA运输、胞质内稳定性的调节 IRE-BP对转铁蛋白受体mRNA稳定性的调节 低铁状态 转铁蛋白受体 mRNA 5’ 编码区 活化的IRE-BP 3’ Poly(A)n 翻译 TfR蛋白 IRE 高铁状态 转铁蛋白受体 mRNA 5’ 编码区 铁 失活的IRE-BP 3’ Poly(A)n mRNA降解 IRE 五、翻译水平的调节 （一）翻译起始因子-2的磷酸化调节蛋白质翻译 （二）RNA 结合蛋白参与翻译起始的调节 IRE-BP对铁蛋白mRNA翻译的调节 低铁状态 5’ 铁蛋白mRNA 活化的IRE-BP 编码区 3’ 翻译不能进行 高铁状态 5’ 铁蛋白mRNA 失活的IRE-BP 铁 编码区 3’ 翻译 （三）对翻译产物水平及活性的调节 (四）siRNA与miRNA 700bp左右RNA前体 配对碱基 DICER 20~25bpmiRNA 5’ RISC 靶mRNA 未配对区域 靶mRNA降解 导入的双链RNA片段 siRNA RDE-1 DICER RISC RISC RISC 5’ 靶mRNA 靶mRNA被核酸内切酶切割 靶mRNA被核酸外切酶降解 miRNA 与siRNA使靶mRNA沉默机制 不同点 siRNA miRNA 机制性质与生物学意义 往往是外源引起的，抗病毒感染等异常情况。 是生物体自身的一套正常的调控机制，调节内源基因表达。 直接来源 长链dsRNA 发夹状pre-miRNA 分子结构 siRNA是双链RNA，3‘端有2个非配对碱基，通常为UU miRNA是单链RNA 作用机制 单链的siRNA结合到RISC复合物中，引导复合物与mRNA完全互补，通过其自身的解旋酶活性，解开siRNAs，通过反义siRNA链识别目的mRNA片段，通过内切酶活性切割目的片段， 成熟的miRNAs则是通过与miRNP核蛋白体复合物结合，识别靶mRNA，并与之发生部分互补，从而阻遏靶mRNA的翻译。 作用位置 siRNA可作用于mRNA的任何部位 miRNA主要作用于靶标基因3′-UTR区 siRNA与miRNA的比较 六、RNA Pol Ⅰ、Ⅲ转录体系的调节相对简单 * + + + + 转录 无葡萄糖（cAMP浓度高）时 有葡萄糖（cAMP浓度低）时 CAP的正性调节 Z Y A O P DNA CAP CAP CAP CAP CAP CAP 当细菌在含有葡萄糖和乳糖的培养基中生长时，通常优先利用葡萄糖，而不利用乳糖 当葡萄糖耗尽后，才利用乳糖，这种葡萄糖对 lac 操纵子的阻遏作用称分解代谢阻遏 葡萄糖能抑制腺苷酸环化酶活性，因而降低cAMP浓度 无葡萄糖，cAMP浓度高；有葡萄糖，cAMP浓度低 （四） 协调调节 mRNA 低半乳糖时 高半乳糖时 葡萄糖低 cAMP浓度高 葡萄糖高cAMP浓度低 RNA-pol O O O O Lac操纵子强的诱导作用既需要乳糖存在又需缺乏葡萄糖 乳糖存在：阻遏蛋白与诱导剂结合不与O序列结合 缺乏葡萄糖： CAP－ cAMP复合物结合在CAP结合位点 Trp Trp 高时 Trp 低时 mRNA O P trpR 调节区 结构基因 RNA聚合酶 RNA聚合酶 色氨酸操纵子的作用原理 操纵子关闭 三、原核生物转录终止调节 两种主要转录终止机制 依赖Rho因子的转录终止 不依赖Rho因子的转录终止 两种终止调节方式 衰减：导致RNA链的过早终止 抗终止：阻止前者的发生，使下游基因得以表达 UUUU…… UUUU…… 调节区 结构基因 trpR O P 前导序列 衰减子区域 UUUU…… 前导mRNA 1 2 3 4 衰减子结构 第10、11密码子为trp密码子 终止密码子 14aa前导肽编码区: