红芪超滤物对x线辐射肝癌hepg2细胞自噬性凋亡及p53基因表达的影响-中西医结合临床(内科)专业论文.docxVIP

中 文 摘 要目的：探讨红芪超滤物对于直线加速器（X 射线）辐射后人肝癌 HepG2 细胞的细胞 周期，凋亡及其 p53 基因表达的影响，为应用红芪超滤物辅助临床放疗增敏治疗肿瘤提 供实验依据。方法：取密度为 1×106 个/mL 肝癌 HepG2 细胞用于实验。实验分为 5 组，设 1 个 对照组（C）即正常对照组，1 个纯辐射组(R)给以源皮距 100cm 4Gy 的 X 射线，另设 1 个单纯加药组(D)给予药物剂量为 50mg/L，1 个先辐射后加药组(R+D)先给予 4Gy 的射 线照射后给予 50mg/L 浓度药物，1 个先加药后辐射组（D+R）给予 50mg/L 药物培养 24 小时后再给予射线照射。光学显微镜下观察细胞外部形态；在电镜下观察细胞超微结构； CCK-8 法检测细胞生长抑制率；用流式细胞仪检测细胞周期变化；并采用 RT-PCR 法检 测细胞中 p53mRNA 基因表达情况。结果：（1）CCK-8 法检测结果：经红芪超滤物作用后的肝癌细胞其 OD 值降低并呈 药物浓度依赖关系（P0.01）。提示其对于人肝癌 HepG2 细胞具有抑制增殖作用。(2)流 式结果显示：红芪超滤物与 X 射线（4Gy）联合作用 HepG2 细胞 48h 后，各组肝癌细胞 较对照组而言 G0/G1 期细胞数均增多，S 期细胞减少（P0.01）；其中 R+D 组和 D+R 组 细胞 G0/G1 期阻滞最为明显，细胞数由 36.6%分别上升至 62.75%、52.7%，凋亡率增加（P0.01），R+D 组 G0/G1 期细胞数多于 D+R 组（P0.05），说明药物预先处理组(R+D) 的周期阻滞作用强于辐射后加药组(D+R)。红芪超滤膜提取物与 X 射线有协同作用，共 同作用于肝癌细胞，可将细胞周期阻滞于 G0/G1 期，延迟 S 期，诱导细胞凋亡。（3）光 镜下形态学观察：C 组细胞形态呈多边形，细胞间排列紧密，细胞大小不一，异形性明 显，细胞膜完整光滑；D 组外形并无明显改变，但密度明显下降；R 组细胞排列松散， 细胞间隙增大，密度进一步下降；R+D 组细胞形态不规则，排列更为松散，细胞体积明 显缩小；D+R 组细胞大多已成圆形，表面散在空泡，仅见模糊的细胞大体轮廓，核染色 质边集。（4）电镜下形态学观察：C 组细胞形态规则，核染色质分布均匀，核仁清晰， 细胞膜完整；D、R 组细胞核染色质密度增高，凝聚在核膜周边，细胞膜皱缩粗糙不完 整；R+D 组细胞核染色质边集、浓缩、线粒体肿胀、内质网扩张，出现空泡变性；D+R 组细胞线粒体进一步肿胀，空泡变性加重，有细胞自噬现象发生，细胞形态改变明显。（5）p53mRNA 基因表达：RT-PCR 结果显示使用红芪超滤物预处理后辐射组较纯辐射 组细胞 p53 基因表达明显增强。结论：红芪超滤物（10 万分子量）对人肝癌 HepG2 细胞具有细胞毒性作用，能够抑制肿瘤细胞增殖，与 X 射线共同作用能提高人肝癌 HepG2 对辐射的敏感性。 关键词：红芪超滤物； X 射线辐射；人肝癌 HepG2 细胞；p53 基因AbstractObjective: To investigate the effect of ultra-filtration extract from Hedysarum polybotrys on human hepatoma HepG2 cells after and before radiation of linear accelerator and the expression of p53 protein. According to experimental results, Providing experimental basis for helping radiation of curing cancer with ultra-filtration extract from Hedysarum polybotrys.Method: Take human hepatoma HepG2 cells of density of 1×106 for experiments. Trialsare divided into 5 groups, set a control group (C) that is normal control group, a pure radiation group (R) to source skin from 100 cm 4 Gy X rays, the other set a simple dosing group (D) given doses of 50 mg/L, a first add after radiation treatme