CN107354154-CN201710633074-H9N2亚型禽流感病毒全基因组测序方法.pdfVIP

(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 CN 107354154 A (43)申请公布日 2017.11.17 (21)申请号 201710633074.2 (22)申请日 2017.07.28 (71)申请人 上海伯杰医疗科技有限公司 地址 201321 上海市浦东新区芙蓉花路500 弄2号楼1-2层 (72)发明人 李晓丹　朱兆奎　赵百慧　 (74)专利代理机构 上海汉声知识产权代理有限 公司 31236 代理人 郭国中 (51)Int.Cl. C12N 15/11(2006.01) C12Q 1/70(2006.01) C12Q 1/68(2006.01) 权利要求书1页 说明书8页 序列表7页 附图1页 (54)发明名称 H9N2亚型禽流感病毒全基因组测序方法 (57)摘要 本发明公开了一种H9N2亚型禽流感病毒全 基因组测序方法，该方法针对H9N2亚型流感病毒 PB2,PB1,PA,HA,NP,NA,MP和NS基因保守区域设 计了覆盖基因全长(开放读码框)16对共32条寡 核苷酸引物序列，如SEQ ID No.1～SEQ ID  No.32所示，并在正反向扩增引物的两端增加了 M13正反向引物序列，简化了基因扩增后的测序 反应步骤。同时公开了待检样本的处理、RT-PCR 反应体系及反应条件、测序反应体系和反应条 件。本发明可以实现对我国大陆流行的H9N2亚型 禽流感病毒全基因组扩增,从而获得H9N2亚型禽 流感病毒的全基因组序列信息，操作简单、应用 A 方便，为我国流行的H9N2亚型禽流感病毒病原学 4 研究及分子进化分析提供了可行的技术方法。 5 1 4 5 3 7 0 1 N C CN 107354154 A 权　利　要　求　书 1/1页 1.一种H9N2亚型禽流感病毒全基因组扩增引物，其特征在于，所述引物包括长度为18 ～26bp的用于扩增不同基因的寡核苷酸片段。 2.根据权利要求1所述的H9N2亚型禽流感病毒全基因组扩增引物，其特征在于，用于扩 增不同基因中，所述基因包括PB1、PB2、PA、HA、NA、NP、MP和NS。 3.根据权利要求1所述的H9N2亚型禽流感病毒全基因组扩增引物，其特征在于，所述引 物为16对，具体包括：H9N2-PB1-F1和H9N2-PB1-R1208、H9N2-PB1-F1039和H9N2-PB1-R2341、 H9N2-PB2-F1和H9N2-PB2-R1383、H9N2-PB2-F997和H9N2-PB2-R2341、H9N2-PA-F1和H9N2- PA-R1352、H9N2-PA-F1235和H9N2-PA-R2233、H9N2-HA-F1和H9N2-HA-R815、H9N2-HA-F615和 H9N2-HA-R1747、H9N2-NA-F1和H9N2-NA-R1251、H9N2-NA-F885和H9N2-NA-R1481、H9N2-MP- F1和H9N2-MP-R743、H9N2-MP-F644和H9N2-MP-R1027、H9N2-NS-1和H9N2-NS-R554、H9N2-NS- F378和H9N2-NS-R890；所述引物序列依次如SEQ  ID No.1～SEQ  ID No.32所示。 4.根据权利要求1所述的H9N2亚型禽流感病毒全基因组扩增引物，其特征在于，所述引 物两端含有不参与目的片段扩增的通用核苷酸序列。 5.根据权利要