CN107090518-CN201710216967-腹泻相关病原体多重RTPCR联合基因芯片检测试剂盒.pdfVIP

(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 CN 107090518 A (43)申请公布日 2017.08.25 (21)申请号 201710216967.7 (22)申请日 2017.04.05 (71)申请人 苏州协云基因科技有限公司 地址 215123 江苏省苏州市苏州工业园区 若水路388号D栋601 (72)发明人 王勇强　刘洋　张鑫磊　 (51)Int.Cl. C12Q 1/70(2006.01) C12Q 1/68(2006.01) C12Q 1/14(2006.01) C12Q 1/10(2006.01) C12Q 1/04(2006.01) C12R 1/93(2006.01) 权利要求书5页 说明书9页 序列表25页 附图2页 (54)发明名称 腹泻相关病原体多重RT-PCR联合基因芯片 检测试剂盒 (57)摘要 本发明涉及一种腹泻相关病原体多重RT- PCR联合基因芯片检测试剂盒，该试剂盒使用多 重特异性保守简并引物组合和探针组合检测26 种腹泻相关病原体中的一种或多种，同时设有内 源对照以及阳性对照和阴性对照。本发明所涉及 的检测试剂盒提高了对高突变病原体目标序列 的覆盖率，避免了多重引物和探针之间非特异性 交叉反应的问题，可实现单个反应体系同时检测 多达20种以上的腹泻相关病原体，为腹泻相关病 原体检测提供一种简单灵敏，快速通量大，可多 指标并行检测的检测工具。 A 8 1 5 0 9 0 7 0 1 N C CN 107090518 A 权　利　要　求　书 1/5页 1.一种腹泻相关病原体多重RT-PCR联合基因芯片检测试剂盒，该试剂盒用于检测以下 病原体中的一种或多种：腺病毒，星状病毒，诺如病毒GI型，诺如病毒GII型，轮状病毒，沙波 病毒，沙门氏菌，志贺氏杆菌，弯曲杆菌，艰难梭状芽胞杆菌，产气荚膜梭杆菌，肠毒素性大 肠杆菌，肠出血性大肠杆菌，肠致病性大肠杆菌，肠侵袭性大肠杆菌，肠聚集性大肠杆菌，霍 乱弧菌，副溶血弧菌，小肠结肠炎耶尔森氏菌，嗜水气单胞菌，单核细胞增多性李斯特氏菌， 阪崎肠杆菌，金黄色葡萄球菌，隐孢子虫，肠贾第虫和痢疾阿米巴虫； 试剂盒内设有腹泻相关病原体的引物组合和探针组合，同时设有人GAPDH基因內源对 照以及阳性对照和阴性对照； 其特征在于引物组合为一组或多组多重特异性保守简并引物(Multiplex  Specific  Conserved Degenerate Primer)组合，其中简并位点的核苷酸表示为R＝A/G，Y＝C/T，M＝ A/C，K＝G/T，S＝C/G，W＝A/T，H＝A/C/T，B＝C/G/T，V＝A/C/G，D＝A/G/T，N＝A/C/G/T，各对 引物的碱基序列5’-3’如下： 腺病毒，反向引物5’端带Cy5标志： 正向引物：CAGACAGGTCRCAGCGACTG， 反向引物：Cy5-5’-AAGTAGGTGCTGGCCATGTC； 星状病毒，反向引物5’端带Cy5标志： 正向引物：TRGARCACTGCCTNTCDCGGAC， 反向引物：Cy5-5’-YRGRCTTRCTAGCCATCRCAC； 诺如病毒GI型，反向引物5’端带Cy5标志： 正向引物：GCARGCCATGTTCCGYTGGA， 反向引物：Cy5-5’-GCGTCYTTAGACGCCAT