CN106970132-CN201610021350-测定过氧化物酶活性的电泳滴定方法.pdfVIP

(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 CN 106970132 A (43)申请公布日 2017.07.21 (21)申请号 201610021350.5 (22)申请日 2016.01.13 (71)申请人 上海交通大学 地址 200240 上海市闵行区东川路800号 (72)发明人 曹成喜　钟冉　谢海洋　张强　 沙敏 贾汉　 肖华　樊柳荫　 · (74)专利代理机构 上海汉声知识产权代理有限 公司 31236 代理人 郭国中 (51)Int.Cl. G01N 27/447(2006.01) 权利要求书2页 说明书7页 附图1页 (54)发明名称 测定过氧化物酶活性的电泳滴定方法 (57)摘要 本发明公开了一种测定过氧化物酶活性的 电泳滴定方法，所述方法包括：将芯片的通道部 分灌满凝胶，阳极池中注入盐酸溶液与背景电解 质溶液的混合溶液a，阴极池中注入化学发光底 液与背景电解质溶液的混合溶液b；将过氧化物 酶溶液注入阴极池中，使之催化化学发光底液反 应生成激发态鲁米诺阴离子L*；酶催化反应稳定 后，施加电场，使阴极池中生成的激发态鲁米诺 + 阴离子L*与阳极池中的氢离子H 形成MRB,生成 的MRB移向阳极；根据MRB移动速率与过氧化物酶 活性存在的函数关系，测得过氧化物酶活性指 标。本发明的方法能够有效地对过氧化物酶的各 A 项酶学指标进行快速测定，并且无需复杂光学检 2 测设备。 3 1 0 7 9 6 0 1 N C CN 106970132 A 权　利　要　求　书 1/2页 1.一种测定过氧化物酶活性的电泳滴定方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤： A、将芯片的通道部分灌满凝胶，阳极池中注入盐酸溶液与背景电解质溶液的混合溶液 a，阴极池中注入化学发光底液与背景电解质溶液的混合溶液b； B、将过氧化物酶溶液注入阴极池中，使之催化化学发光底液反应生成激发态鲁米诺阴 离子L*； C、酶催化反应稳定后，施加电场，使阴极池中生成的激发态鲁米诺阴离子L*与阳极池 + 中的氢离子H 形成MRB,生成的MRB移向阳极； D、根据MRB移动速率与过氧化物酶活性存在的函数关系，测得过氧化物酶活性指标。 2.根据权利要求1所述的测定过氧化物酶活性的电泳滴定方法，其特征在于，步骤A中， 所述凝胶为琼脂糖凝胶，质量分数为1％～2％。 3.根据权利要求1所述的测定过氧化物酶活性的电泳滴定方法，其特征在于，步骤A中， 所述凝胶中含有背景电解质溶液。 4.根据权利要求1或3所述的测定过氧化物酶活性的电泳滴定方法，其特征在于，所述 背景电解质溶液为离子强度为20mmol/L～250mmol/L的氯化钠或者氯化钾溶液。 5.根据权利要求3所述的测定过氧化物酶活性的电泳滴定方法，其特征在于，所述凝胶 中的背景电解质溶液的离子强度与混合溶液a离子强度相同。 6.根据权利要求3所述的测定过氧化物酶活性的电泳滴定方法，其特征在于，所述凝胶 中的背景电解质溶液的离子强度与阴极池中背景电解质溶液的离子强度相同。 7.根据权利要求1所述的测定过氧化物酶活性的电泳滴定方法，其特征在于，步骤C中， 所述施加的电场为10V/mm～15V/mm。 8.根据权利要求1所述的测定过氧化物酶活性的电泳滴定方法，其特征在于，步骤D中， 所述过氧化物酶活性指标包括：酶活性，酶的比活性，酶促反应速率，最大