丙型肝炎病毒感染的抗体应答PPT.pptVIP

丙型肝炎病毒感染的抗体应答及其免疫测定  卫生部临床检验中心 李金明 ? 丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus, HCV)是输血后肝炎的主要病原； 目前的检测手段主要是采用ELISA方法检测献血员血中的抗HCV抗体； HCV感染者血循环中存在针对HCV不同蛋白的抗体，且具体针对某种蛋白的抗是否出现、出现的时间、持续时间长度均有所差异，因此，ELISA测定时所使用的包被抗原必须全面，才能有效地检出所存在抗体； 但在实际工作中，由于不同的抗HCV ELISA试剂盒生产厂家所使用HCV抗原的来源、质量及包被浓度各有差异，使得在测定中对同一份样本所测定的结果有时会出现很大的差异，尤其是对较弱阳性的样本或仅出现针对HCV单个蛋白成份的抗体的样本。 丙型肝炎病毒的分子生物学 HCV为一有包膜呈球形的正单链RNA病毒; HCV的基因组全长约9.4kb，由一过长的5’非编码区（5’-non coding region, 5’NCR）、大的约9033个核苷酸（nt）开放读码框架(open reading frame,ORF)和一含poly（A）或poly（U）的3’非编码区（3’NCR）尾部三部份组成(图1) 丙型肝炎病毒的分子生物学 丙型肝炎病毒的分子生物学 通常采用基因工程方法，表达上述结构和非结构区蛋白作为包被抗原来建立抗HCV检测的ELISA方法。 HCV的5’NCR的保守性最好，故RT－PCR检测HCV RNA的引物设计多选用该区域。 丙型肝炎病毒的分子生物学 Jens Bukh对所有的HCV序列比较和分析后认为：（1）HCV至少可分为9个主要基因型和30多个基因亚型；（2）各基因型间核酸水平的同源性为65.7%～68.9%，各亚型间为76.9%～80.1%，同亚型间为90.8%～99.0%，符合基因分型原则；（3）已证实采用部份基因组区段和全基因组序列进行基因分型具有很好的一致性，但除E1和NS5b外，其它各区的代表性并不完全，因此建议E1和NS5b是将来进一步基因分型的最好选择片段；（4）在众多的基因分型方法中，均各有其优缺点，唯一可信而又可用于鉴定新的基因型的方法，就是选择特定的HCV基因区段特别是E1区进行测序分析。 丙型肝炎病毒的分子生物学 HCV基因型的分布有明显的地区差异。 1型和2型呈广泛分布，1a和1b是北美、南美和欧州的主要株型，而1b是大多数亚州国家的主要株型；3型主要分布尼泊尔、泰国、英国、澳大利亚、芬兰及新西兰等国；4型是中北非州国家的主要株型；5型则是南非国家的主要株型；6型在香港和越南占重要比例；7、8、9型均从越南病例中发现。 在我国以1b和2a为主要株型，其它基因型少见。 HCV感染的免疫应答的特点 （1）HCV作为单链RNA病毒，复制活性较低，感染过程中诱生α、β干扰素的能力弱于双链RNA病毒； （2）HCV的变异主要在包膜蛋白编码区，机体的免疫作用可加速这种选择性变异并很快在受染者体内出现准种及主要株型的转换，表现出多相免疫应答反应； （3）由于HCV核酸具有感染性，因此可阻止病毒在细胞间传播的抗体、干扰素对HCV核酸来说将无能为力； （4）HCV在感染者体内滴度较低，虽然能诱导免疫应答的产生，但在多数情况下可能不足以诱导有效的病毒清除反应。 机体对HCV感染的抗体应答 对非结构蛋白的抗体应答 对衣壳蛋白的抗体应答 对包膜蛋白的抗体应答 （一般认为C区和NS4区蛋白能诱导机体较强的抗体应答） 对HCV非结构蛋白的抗体应答（1） HCV的非结构蛋白编码区的产物NS2、 NS3、 NS4和NS5四种蛋白，除NS2外其它均能有效地诱导HCV感染者的抗体应答。 抗NS3抗体的出现明显早于其它抗体，与抗NS4和NS5抗体不同的是，其可能是构象依赖性的，因为使用NS3的合成多肽不能检出相应的特异性抗体。 而NS4区则含有至少两个免疫优势序列位点，抗原性较强，绝大多数HCV感染者能产生针对该区C100－3的抗体反应。 对HCV非结构蛋白的抗体应答（2） 当HCV感染者抗NS3和抗NS4抗体阴性时，针对NS5区病毒RNA聚合酶的抗体反应可为阳性，并且其血清转换要早于其它抗原。在慢性HCV感染者中有79％的病人出现对该区的抗体反应。由于NS5区的这些抗体应答特征，它已被用于第三代ELISA HCV诊断试剂中，试图增加诊断的敏感性和特异性。 由于非结构蛋白均在细胞内产生，在细胞内即完成其生物学功能。因此，机体对这些蛋白产生的抗体无保护作用，除了作为HCV感染的指标外，其是否通过诸如免疫复合物、抗体依赖的细胞毒作用等方式参与HCV或缺陷颗粒的清除以及肝内、肝外组织免疫损伤过程尚