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FSP-1通过notch信号参与慢性肾病AVF的机制研究 汇报人：曾惜我将从以下几个方面向大家介绍我的研究论文。首先是研究背景单击目 录C o n t e n t s结 果讨 论结 论材料与方法研究目的研究背景研究背景 Research Background/subview/1367479/1367479.htm慢性肾脏病(Chronic Kidney Dielace ，CKD),即各种原因引起的慢性肾脏结构和功能障碍的疾病。近20年来，由于患病率高、防治率低、病因谱发生显著变化（糖尿病、高血压等人数迅速上升），已成为继心脑血管病、肿瘤、糖尿病之后的一个威胁人类健康重要疾病。研究背景 Research Background 血液透析与动 静 脉 內 瘘 血液透析（hemodialysis，HD）是急慢性肾功能衰竭患者肾脏替代治疗方式之一，它能建立和维持的一个有足够功能的血管通路(vascular access)，即动静脉内瘘(AVF)。自体动静脉内瘘是目前终末期肾脏病（ESRD，即尿毒症）?患?者?进行透析治疗时应用最?广?泛??的?慢?性?血?管?通?路,是保证透析顺利进行和提高患者生存质量的关键。?但是，内?瘘?的使用过程中会因为血栓形成或内膜增生等导致失败。研究背景 Research Background血管内膜增生4、血管重构, AVF狭窄 1、 内皮细胞(EC)损伤3、血管内膜SMC增生、 细胞外基质沉积 2、动脉平滑肌细胞（SMC）的 迁移、异常分化 自体动静脉内瘘功能障碍研究背景 Research Background小鼠实验研究发现，Notch信号通路是调节血管内皮细胞功能和血管新生的关键。激活的Notch/RBP-Jk信号可以增强由CDK引起的血管内膜增生。同时， Notch信号通路可以调控血管重塑，抑制了Notch信号或者敲除RBP-Jk，都可以下调FSP-1的表达，阻止平滑肌细胞的迁移，从而抑制血管内膜增生Notch信号通路TGF-β,活化notch信号DAPT,r-分泌酶抑制剂，抑制Nnotch信号通路途径可概括为：Delta→Notch→酶切→ICN→进入细胞核→CLS-ICN复合体→基因转录。结 果讨 论结 论材料与方法研究目的研究背景研究目的Research Objective材料与方法 Materials and methods Reporter Assay EMSA ChIP材料与方法 Materials and methods1、启动子区域的确定生物信息学预测启动子区域↓克隆5 ′-flanking sequence并连接到报告基因载体上↓缺失突变 ↓荧光素酶活性分析↓确定转录调控区域（启动子区域）材料与方法 Materials and methodsRBP-jk consensus sequence in FSP-1 promoterlocationconsensus sites-1832 to -1826ctcccac-1568 to -1562atgggaa-1460 to -1454 tttccac-1452 to -1446 gcGggaa-1414 to -1408 gagggaa-1357 to -1351 gtgggga-1198 to -1192 gtgggag-815 to -709 ttcccac-692 to -686 tccccac-366 to -360ctcccac-178 to -172 tacccac-168 to -162 tgcccac-161 to -155ctgggaa生物信息学预测启动子区域材料与方法 Materials and methods提取基因组PCRTAK101-t-vectorFSP-1启动子区序列+pGL4-basic vectorTAK101-t-FSP-1HindIII+EcoR VHindIII+EcoR VFSP-1pGL4-basicpGL4-FSP-1FSP-1启动子区荧光素酶报告载体构建材料与方法 Materials and methods荧光素酶活性分析酶切位点材料与方法 Materials and methodsPCR转化5′3′5′3′plasmid of pGL4-C未突变的用Dpn I甲基化酶消化自身连接：缺失突变引物：突变位点 m：同源序列Not Transformed 缺失突变材料与方法 Materials and methods凝胶迁移阻滞实验(EMSA) EMSA是一种在体外研究蛋白质与核酸相互作用的技术，可用于定性和定量分析。仅以DNA与蛋白质相互作用为例介绍EMSA材料