信号转导的核酸分子基础PPT.pptVIP

(3)三氯甲烷法 1.三氯甲烷-戊醇除蛋白（中间层） 2.水相提取DNA 3.三氯甲烷-戊醇再除蛋白 4.水相再提取DNA（至无蛋白凝胶） (4)酶法 蛋白酶除蛋白 核酸酶除RNA 提纯DNA （1）Trizol法（异硫氰酸胍苯酚混合液相提取法） 异硫氰酸胍裂解细胞→核蛋白体分离→RNA释放到水相 2.RNA的提取分离 （2）硅胶膜特异性吸附离心柱提取法 异硫氰酸胍裂解细胞→抑制RNA酶→RNA释放→硅胶特异性吸附RNA →除去蛋白质和DNA →低盐洗脱RNA RNA分布 三、核酸含量测定的原理 （一）定磷法P：9.4%~9.6% （二）定糖法 1.核糖 2.脱氧核糖 （三）紫外吸收法 （四）环核苷酸的检测 1.竞争性蛋白结合法测cAMP （125I－cAMP放免试剂盒 ） 2.放射性免疫法测细胞内cGMP浓度 第六节 信号转导的脂类分子基础 脂肪酸 (fatty acids) 脂肪(fat) 甘油三酯(动物) 油(植物源) 类脂(lipids) 磷脂 固醇及其酯 相关化合物 脂类 三酰甘油 甘油磷脂 (phosphoglyceride) 胆固醇酯 FA 胆固醇 FA FA FA 甘油 FA FA Pi X 甘油 X=胆碱、水、乙醇胺、丝氨酸、甘油、肌醇、磷脂酰甘油等。 一、脂类基本构成： 分类 含量 分布 生理功能 脂肪 三酰甘油 95﹪ 脂肪组织、血浆 1. 储脂供能 2. 提供必需脂酸 3. 促脂溶性维生素吸收 4. 热垫作用 5. 保护垫作用 6. 构成血浆脂蛋白 类脂 糖酯、胆固醇及其酯、磷脂 5﹪ 生物膜、 神经、 血浆 1. 维持生物膜的结构和功能 2. 胆固醇可转变成类固醇激素、维生素、胆汁酸等 3. 构成血浆脂蛋白 脂类的分类、含量、分布及生理功能 脂类的生理功能  血浆脂蛋白 组成：蛋白质、甘油三酯、磷脂、胆固醇及其酯 内核： 甘油三酯 胆固醇酯 中性脂类 * 信号转导的核酸分子基础 1.碱基 嘌呤 嘧啶 腺嘌呤 鸟嘌呤 尿嘧啶 胸腺嘧啶 胞嘧啶 存在于DNA和RNA中 仅存在于RNA中 仅存在于DNA中 一、核酸的组成与结构 (一）核苷酸 嘌呤(purine，Pu) 腺嘌呤(adenine, A) 鸟嘌呤(guanine, G) 嘧啶(pyrimidine，Py) 胞嘧啶(cytosine, C) 尿嘧啶(uracil, U) 胸腺嘧啶(thymine, T) 稀有碱基 3.核苷 嘌呤N-9 或嘧啶N-1与脱氧核糖C-1?通过β-N-糖苷键相连形成脱氧核苷(deoxyribonucleoside)。 嘌呤N-9或嘧啶N-1与核糖C-1?通过β-N-糖苷键相连形成核苷(ribonucleoside)。 N N N N 9 N H 2 O O H O H H H H C H 2 O H H 1 2 糖苷键 核苷或脱氧核苷与磷酸通过酯键结合构成核苷酸(ribonucleotide)或脱氧核苷酸(deoxyribonucleotide)。 4.核苷酸(ribonucleotide) N N N N 9 N H 2 O O H O H H H H C H 2 H 1 2 O P O - H O O 糖苷键 酯键 多磷酸核苷酸 cAMP ★（二）环化核苷酸 cGMP 5′-末端 3′-末端 C G A 磷酸二酯键 磷酸二酯键 （三）DNA的分子结构 Watson-Crick模型 Watson，James Dewey （詹姆斯·沃森；1928～ ) 弗朗西斯·哈里·康普顿·克里克（Francis Harry Compton Crick 1916.6.8—2004.7.28） *Chargaff 规则 研究背景 获得了高质量的DNA分子的X射线衍射照片。 提出了DNA分子双螺旋结构(double helix)模型。 a.富兰克林 b.DNA的X线衍射图片 碱基互补配对 三链结构 鸟嘌呤之间通过Hoogsteen氢键形成特殊的四链结构(tetraplex)。 四链结构 原核生物DNA多为环状，以负超螺旋的形式存在，平均每200碱基就有一个超螺旋形成。 核小体串珠样的结构 核小体链和螺旋管 双链DNA的折叠和组装 1. 基因组DNA与蛋白质结合成染色体，存于细胞核，（除配子细胞外，体细胞内的基因组是双份的，即双倍体,diploid）有两份同源的基因组。 真核生物DNA特点 2.基因转录产物为单顺反子； 即一个结构基因经过转录和翻译生成一个mRNA分子和一条多肽链。 3.存在重复序列，重复次数可达百万次以上； 4. 基因组中不编码的区域多于编码区域