重大科学研究计划课题报告.docVIP

国家重点基础研究发展计划（重大科学研究计划）课题年度报告 项目编号：2012CB910600 项目名称：蛋白质定量新方法及相关技术研究 课题编号：2012CB910603 课题名称：基于色谱-质谱的蛋白质组绝对定量新方法和新技术 2012年11月21日 一、年度计划执行情况 1.年度计划完成情况 按照按任务书的要求，本课题在2012年度主要针对基于色谱-质谱的蛋白质组绝对定量新方法和新技术，展开了：1）建立了内标肽段制备、表征和含量测定；2）建立了多肽、糖蛋白纯度和稳定性的毛细管电泳表征方法及蛋白质分子印迹光子晶体的制备方法； 3）建立了基于多反应检测（MRM）质谱技术高通量蛋白质确认策略；4）蛋白质鉴定平台的构建及其在绝对定量中的应用研究；5）糖肽的多反应检测质谱相对定量分析方法研究及应用；6）基于MALDI-MS技术的金属元素标记多重相对定量方法研究。按项目任务书的规定，完成了研究内容和预期目标。 在内标肽段制备、表征和含量测定方面，建立了化学和生物合成标准肽段方法，通过QconCAT方法的制备内标肽，对50个目标肽段，成功合成了其中48个肽段。建立了基于标准氨基酸、稳定同位素标记的氨基酸同位素稀释法结合选择性反应检测质谱的含量测定方法，测定了5条目标肽段的绝对含量，该方法的精密度和准确度均满足定量要求。 在多肽、糖蛋白纯度和稳定性的毛细管电泳表征方法及蛋白质分子印迹光子晶