(精选)医学分子生物学 第三部分 基因诊断与基因治疗课件.pptVIP

五　基因诊断的应用 （一）遗传性疾病的基因诊断 （二）感染性疾病、寄生虫的基因诊断 （三）肿瘤的基因诊断 一、遗传性疾病的基因诊断 地中海贫血（包括α-地贫和β-地贫） 镰状细胞贫血 我国常见的遗传性疾病有地中海贫血、异常血红蛋白病、G6PD缺乏症、血友病等。 产前早期诊断，杜绝患儿出生。 镰状细胞贫血（sickle cell anaemia, siclemia）是一种血红蛋白病。 突变：β珠蛋白GAG(Glu)　　GTG(Val) 后果：溶血性贫血 ，死于成年前 。 分子机理： Hb A CCT GAG GAG Hb S CCT GTG GAG 　 Hb A Hb S ▲ MstⅡ 1.1Kb 0.2Kb 1.3Kb 野生型 突变型 1.基因诊断（旧）： 　提DNA― MstⅡ消化― 电泳― southern杂交―分析 （与32P标记的探针杂交，放射自显影检测） 2.基因诊断（新）： 提DNA―PCR―MstⅡ消化―电泳― 分析 HbA HbS ▲ 103bp 191bp 294bp 野生型 突变型 （二）肿瘤的基因诊断 肺癌： 检测ras基因突变、p53突变或缺失 PCR/ASO, PCR/SSCP/ DNA 测序 检测ras, myc, src, erb基因的过表达： 提肿瘤组织mRNA，RT-PCR （三）病毒性疾病的基因诊断 丙型肝炎 hepatitis C virus, HCV HCV是一种RNA病毒，全长9.4kb。 有显著的异质性，同源性仅60-92％。 外周血中HCV RNA含量极低。 方法：巢式PCR 引物：选用RNA5’端相对保守的非编码序列 外周血RNA 逆转录 PCR1 　PCR2 电泳 乙型肝炎HBV 的基因诊断： 外周血DNA，PCR1，PCR2，电泳检测 六、基因诊断在法医学中的应用 短串联重复序列多态性分析 短串联重复序列多态性分析 短串联重复序列（short tandem repeat, STR）又称微卫星DNA。由2-10 bp重复单元组成STR，片段长100-500 bp，广泛分布于人类基因组。 约50％的STR位点具有高度多态性。 原理：STR较短，各位点PCR扩增条件相差不大，可同步扩增。 操作： 提DNA 多重PCR 电泳 分析 优点：STR分布于整个基因组中， 故可分析部分降解样品。 简单、方便。 1998年Lins对12个STR位点进行复合扩增，个体匹配几率小于3.3×10-12。 目前已有13个STR位点，进行复合扩增。 ? STR-PCR技术在法医学的个人识别和亲子鉴定中已逐步占主导地位。 基因治疗 gene therapy 基因治疗的概念： 基因治疗是在DNA、RNA水平上采取疾病治疗的方法。 基因治疗的范围：肿瘤、遗传病、感染性疾病（HIV，SARS）、心血管疾病、神经系统疾病等。 一 基因治疗是在核酸水平上开展疾病治疗 一、基因治疗的主要策略 （一）基因置换replacement（基因矫正） 将特定的目的基因导入特定的细胞，对基因进行精确的原位修复，不涉及基因组的其他改变，以导入的正常基因置换原有的缺陷基因。 转导基因的载体具有与染色体DNA相同的序列，通过同源重组实现基因的置换。 Capechi应用小鼠胚胎干细胞实现了HPRT基因的定点重组。基因重组是最理想的基因治疗，但同源重组的效率仅1/10万。 （二）基因添加augmentation 一是针对特定的缺陷基因导入其相应的正常基因，而细胞缺陷的基因并未除去,通过导入的正常基因表达正常的产物，从而补偿缺陷基因的功能。 二是向靶细胞中导入它本来不表达的基因或没有的基因，利用其表达产物达到基因治疗的目的。 （三）基因干预interference 采用特定的方式抑制某个基因的表达，或通过破坏某个基因使之不能表达，以达到治疗的目的。 方法：反义技术（反义RNA、反义DNA、核酶、三链技术、RNA干扰 ）自杀基因技术 靶： 癌基因、病毒基因 第三部分