菌种的管理和保藏概要.pptVIP

* * 菌种应冷藏或冷冻保存，保存菌种的冰箱不得放置食品和易挥发性药品，放置菌种应有专用的冰箱，应上锁管理。 由专人按操作规程和有关要求定期进行传代，并定期对保存的菌种进行检查，一般每年1～2次，（或定期更换冻干菌种）。发现菌种的异常情况应及时检查。一旦发现菌种污染和变异现象，应立即报告、研究处理。尤其长期保存时。 菌种的管理 * * 详细记录 菌种的来源、接收、传代、分离、复壮、使用和鉴定等均应做好详细记录。包括菌保存位置、环境(温度)、种传代或使用时间、名称、菌号、代数、传代或保存形式、分离、复壮方式、使用内容、鉴定情况等都应进行详细的记录。 * * 菌种不得随意带出实验室，外单位索取、购买应有证明和登记，并包装严密。 菌种处理应严格按操作规程进行，灭菌处理应有详细记录。 * * 菌悬液的制备与保存 采用经验证的方法制备菌悬液，除另有规定外，微生物限度试验用菌悬液的制备如下： 1、接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基或营养琼脂培养基中，培养18～24小时. 2、接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基或改良马丁琼脂培养基中，培养24～48小时。 上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数为10～100cfu的菌悬液。 * * 3 、接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基 中，培养5～7天。 加入3～5ml 含0.05％（v/v）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化 钠溶液，将孢子洗脱。然后，用适宜方法吸出孢子悬液至 无菌试管内，用含0.05％（（v/v）聚山梨酯80的0.9%无 菌氯化钠溶液制成每1ml含孢子数50～100cfu的孢子悬液。 * * 4 、菌悬液制备后应在2小时内使用，若保存在2～8℃的菌悬液可以在24小时内使用。黑曲霉也可制成稳定的孢子悬液保存在2～8℃，在验证过的贮存期内替代对应量的新鲜孢子悬液使用。 * * * * 菌种的保藏和管理 杜平华 * * 菌种保藏的重要性 菌种保藏是微生物学检验工作中的一项常规技 术，菌种的科学保藏和管理直接关系到检验结 果的正确性。 * * 菌种的来源 国内或国外认可的菌种收藏机构的标准菌株，或使用与标准菌株所 有相关特性等效的商业派生菌株。 * * - 广泛收集各种有用的微生物菌种。 -选择最适宜的保藏方法。 菌种保藏的中心任务 * * 常用菌种保藏方法 菌种保藏的原则 根据微生物菌种的生理、生化特性 降低微生物细胞的代谢强度。 * * 标准菌株的复活或培养物的制备应按供应商提供的说明或按验证的方法进行。 标准储备菌株-从国内、外菌种收藏机构获得的标准菌株经复活并在适宜的培养基中生长后,既为标准储备菌株。 菌种的保藏 * * 菌种的保藏 抑制微生物的代谢和生长繁殖， 如低温、干燥和真空等 标准储备菌株经纯度和特性确认后，分装于小瓶中, 可采用低温冷冻干燥，液氮储存，超低温冷冻(低 于-70℃)等方法保存。 * * 菌种的保藏 低于-70℃或低温冷冻干燥可以延长菌种的保存时间. 标准储备菌株可用于制备每月或每周一次转种的工作 菌株。 冷冻菌株一旦解冻转种制备工作菌株后,不得重新冷冻 或再次使用。 * * 菌种的保藏 工作菌株不可代替标准菌株，标准菌株的商业衍 生物仅可用作工作菌株。 * * 菌种的保藏 不同的微生物，应根据其生物特征来选择最适宜的 保藏方法，菌种的保藏方法一般分四个阶段： * * ⑴?挑选特征典型的纯菌菌落。 ⑵确定保藏的合适菌体形态，孢子和芽孢死亡代谢作用弱，同时对恶劣环境 有很强的抵抗力。 ⑶选择最适宜的方法。 ⑷定期对保藏的菌种进行鉴定，确定保藏方法的有效性。 菌种的保藏 * * 方法 主要原理 适用的微生物 保藏时间 特点 液氮超低温保藏法 超低温 广泛 数十年 复杂、需要专门设备，有效 冷冻真空干燥保藏法 干燥、缺氧、低温 广泛 5～10年以上 复杂、需要专门设备和方法，有效 干燥（沙土、牛奶）保藏法 干燥、无营养 产孢微生物 1～10年 较简便，需制备沙土管，有效 液体石蜡保藏法 低温、缺氧 广泛 1年以上 简便 琼脂斜面低温保藏法 低温 4℃ 广泛 短时间 简便 液体冷冻保藏法 液体培养基 低温 广泛 半年以上 简便 一定比例甘油