(精选)配子与胚胎生物工程教学课件.ppt

2.2 手术过程 皮肤用外科刀一次切开，4-6厘米。肌肉用钝性分离的方法沿肌纤维的走向分层切开，最后切开腹膜。注意及时止血。 手术者将食指及中指由切口伸入腹腔触摸子宫角，用二指夹持，因势利导地牵引至创口表面，先循一侧的子宫角至该侧的输卵管，在输卵管的末端弯转处找到该侧的卵巢，观察卵巢表面的排卵点和卵泡发育情况并做记录。 2.3 冲洗输卵管法 适宜于2--3日龄的胚胎。 将一根长5-7cm，外径3-4mm的硅胶管插入输卵管喇叭口内1-1.5cm，用血管夹或手固定。以左手母指和食指捏住子宫角前端，右手持吸有冲卵液的针管并将针头插入子宫角尖端，注入冲卵液约10-15ml。 输卵管回收胚胎示意图 供体的冲胚 2.4 冲洗子宫法 适宜于5-7日龄胚胎。 子宫角回收胚胎示意图(1) 子宫角回收胚胎示意图(2) 用作受体的母畜应具有明显的发情症状，发情时间应与供体母畜一致。 羊采用手术法移植。 受、供体同时做好术前准备，在进行胚胎检查的同时或之后，立即在受体母畜腹部做一切口，轻轻拉出子宫角，找到排卵侧的卵巢并观察黄体数量与发育情况。 3. 胚胎的移植 只有黄体发育良好的受体才能用于胚胎移植，黄体过小、发育异常或退化的受体都不能用于胚胎移植，否则很难受孕。 卵巢上有1个黄体的受体一般只给移1枚胚胎，有2个或2个以上黄体者可以移2枚胚胎。 根据胚胎的发育阶段以及回收与移植部位一致的原则，用移植管将胚胎注入黄体同侧子宫角前端或通过喇叭口送至输卵管壶腹部（如图），然后迅速复位、缝合。 注意：保护受体卵巢黄体。 山羊手术法移胚A.子宫移胚器 B.子宫角移胚 C.输卵管移胚1.移植针 2.硅胶管 3.吸有胚胎的细管 麻醉、固定 刮 毛 缩短黄体期的前列腺素法(PG法) 延长黄体期的孕酮法 3.2 同期发情方法 PGF2α有溶解黄体的作用，从而引起发情，所以只对卵巢上存在黄体的受体有效。 在情期第9天以后，注射PGF2α，常可在注射后2-3天内发情(WHY?)。 对于不能确定发情周期的受体，可采用间隔10-12天的两次注射法。 此方法方便可靠，但费用较高。 为何要进行两次注射？ 3.2.1 前列腺素处理法 s 母牛发情周期 第7-17天，对前列腺素（PG）有反应 孕酮能够抑制腺垂体释放FSH，每日肌注或口服孕酮，或经阴道海绵栓给予孕酮或其类似物，一般处理12-18天后，可以抑制卵泡发育。停止处理或撤除海绵栓后，孕酮的抑制作用消失，卵巢上即有卵泡发育，通常在2-3天内发情。 为了提高排卵的效率，在孕激素处理结束的前一天，可以给予小剂量的FSH。 此法费用低，但处理时间长。 3.2.2 孕激素处理法 4.1 冲胚液和保存液的制作 冲胚液有很多种，目前最常用的为含5%犊牛血清的杜氏磷酸盐缓冲液（D-PBS），也可用于体外短期保存胚胎。 保存时间长或体外培养多用M-199液。 4.胚胎的收集 4.2 回收过程 牛适宜于5-7日龄胚胎; 现均采用二通管非手术采卵法：用直肠把握子宫颈法插入带有探针的二通管直至一侧子宫角的基部，通过打气孔注入8--10ml空气,抽出探针，通过中心管道反复注入--回收冲卵液,连续5--6次。同样方法冲另一侧子宫角。 PBS 集卵杯 子宫颈 子宫角 卵巢 牛的非手术法回收胚胎 a.冲卵液 b.硬膜外麻醉 c.插入子宫中的Foley管 d.子宫颈 子宫角回收的液体较多，可以通过专用胚胎漏斗除去多余的冲卵液，在连续变倍解剖显微镜（实体显微镜）下进行检胚； 胚胎的质量评定：主要采用形态学方法，优质胚胎才能用于进行胚胎冷冻或移植。 5.胚胎的检查和评定 A级;形态完整,轮廓清晰,呈球形,分裂球大小均匀,透明带适中； B级;轮廓清晰,色调和细胞密度良好； C级;轮廓不清楚,色调发暗,结构较松散,游离的细胞和液胞较多； D级;轮廓模糊,色调暗,结构松散,碎片细胞和液泡很多。 5.1 胚胎的分级标准 5.2 不同发育阶段的正常胚胎 5.3 未受精卵或异常胚胎 2-cell 4-cell 8-cell 16-cell Morula Blastocyst 5.4 正常胚胎的形态 6.胚胎的移植 重点应检查子宫和卵巢的异常情况以及子宫的紧张性，然后检查卵巢上黄体的发育情况（位置、大小），只有黄体发育良好者才能正式列为待移植母牛，并记录和在牛臀部标出黄体位于左右哪一侧。 牛站立保定于六柱栏保定架内，用2%盐酸利多卡因或普鲁卡因进行荐尾椎硬膜外麻醉，用18号针头，每只牛约5ml。 6.1受体母牛的准备  1.1ml注射器 2.装管接头 3.细管 A.棉塞 B.气泡 Ⅰ、Ⅲ、保护液 Ⅱ.含胚段 装管器械和装管方法 6.2 胚胎的移植方法 直肠