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系 统 实 验 之 二 T淋巴细胞功能测定;实
验
流
程;实验内容;教学要求;实验步骤;细胞计数板;细胞培养:
按图所示加板。
将板做好标记,在倒置显微镜下观察细胞,然后放于37℃ 5%C02培养箱中,培养48小时。
MTT掺入:(隔一天 下午2:00)
在终止培养前2小时,在显微镜下观察细胞转化情况。
每孔内加入MTT(5mg/ml) 10μl,加完后轻轻搕板,使MTT和细胞混匀。
在37℃ 5%C02培养箱中继续培养2小时,然后离心2000rpm,5min,轻轻弃去上清,(注意不要将孔底部的颗粒物弃出)。
加入100μl 二甲亚砜(DMSO),将颗粒溶解。 (隔一天 下午4:00)
结果测定:
结果测量:用酶标仪测定光密度值:A570nm(用空白孔调零),记录结果。
结果判定: SI(刺激指数)=Con A刺激孔 A值 / 对照孔A值;预习内容;八个人一块培养板,两人加脾,两人加胸腺
每孔加入100 μl调好的细胞悬液
1-3孔加入10%FCS-IMDM 培养液, 100 μl
4-6孔加入2.5 μg/ml的Con A, 100 μl
7-9孔加入5 μg/ml的Con A, 100 μl
10-12孔加入10 μg/ml的Con A, 100 μl
NOTE:ConA用10%FCS-IMDM培养液配制;八个人一块培养板,两人加脾,两人加胸腺
每孔加入100 μl调好的细胞悬液
1-3孔加入10%FCS-IMDM 培养液, 100 μl
4-6孔加入2.5 μg/ml的Con A, 100 μl
7-9孔加入5 μg/ml的Con A, 100 μl
10-12孔加入10 μg/ml的Con A, 100 μl
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